雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 診斷試劑盒(酶聯免疫法)說明書(shu)
【產(chan) 品名稱】
通用名稱:雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 診斷試劑盒(酶聯免疫法)
英文名稱:Diagnostic Kit For Antibodies To
Chicken Infectious Bursal Disease Virus VP2(IBDV-VP2 Ab),ELISA
【規格】
96T×2/盒
【預期用途】
本試劑盒主要目的是測定雞血清中雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗體(ti) 的相對水平。可用於(yu) 評估雞群雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理,由包被有高純度的雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒VP2抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗雞IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的IBDV-VP2-Ab結合,再與(yu) 酶標抗雞IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+IBDV-VP2-Ab+酶標抗雞IgG抗體(ti) ”複合物,加入顯色劑,通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) IBDV-VP2-Ab的量成正比,當樣本反應顯色後,經酶標儀(yi) 檢測所得結果超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性,即表明免疫產(chan) 生了抗體(ti) 或有自然感染存在。
【主要組成成份】
1 | IBDV-VP2抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | IBDV-VP2-IgG陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | IBDV-VP2-IgG陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
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10 | 說明書(shu) | 1份 |
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【自備器材】
1.酶標儀(yi) ,雙波長450/630nm濾光片
2.精q的微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.洗液吸移裝置
6.一次性槍頭(10ul,200ul)
7.去離子水
【樣本要求】
1.本試劑檢測的樣本為(wei) 雞血清,樣本應無菌采集,2℃~8℃貯存應不超過一周,長期應在-20℃以下保存。
2.避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
3.樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。
【實驗準備】
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋,稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。
3.配製洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液量取適量體(ti) 積直接用去離子水稀釋20倍,即可使用。
【檢驗方法】
1.加樣:根據樣本數量,取所需板條,檢測時,設陰、陽性對照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl於(yu) 相應孔中。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗)。2.溫育:加樣後,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鍾。
3.洗板:甩去孔內(nei) 液體(ti) ,用洗滌液注滿反應板孔,靜置10s,直接甩出,洗滌3次,後一次洗滌後吸幹板內(nei) 液體(ti) 。
4.加酶:每孔加酶標記物100μl。
5.溫育:加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鍾。
6.洗板:同步驟3。
7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應10分鍾。
8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止後即讀數。
9.讀數:以450/630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。
【結果判定】
在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否,或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定,S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值,PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值;
當樣本的S/P≥0.2時判為(wei) 陽性;樣品S/P值<0.2時判為(wei) 陰性。
若進行大量樣本檢測時,可使用試劑盒專(zhuan) 業(ye) 分析軟件進行分析數據結果,該軟件可登陸本公司*網站下載。
【檢驗結果的解釋】
1.嚴(yan) 重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽性;長菌的樣本可能導致假陰性。
2.因個(ge) 體(ti) 差異或免疫時間長短等因素可能會(hui) 出現個(ge) 別雞隻免疫疫苗後檢測結果為(wei) 陰性。
3.陽性結果用於(yu) 感染雞的血清學診斷以及流行病學調查時需結合其他診斷方法和臨(lin) 床資料進行分析。
【注意事項】
1.本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 體(ti) 外診斷。
2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不用批次的組分混合使用。
3.使用試劑盒之前,一定要仔細閱讀說明書(shu) 。
4.本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待,試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鍾,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鍾後廢棄。
5.微孔板從(cong) 冷藏環境中取出時應在室溫中平衡至潮氣幹盡後方可拆開,未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封2℃-8℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋,與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2℃-8℃避光保存。
6.若20倍濃縮洗滌液出現結晶,屬正常現象,放置37℃至溶解後即可。
7.應用微量移液器加入樣本及試劑,並經常校對其準確性。
8.加洗滌液時應做到滿而不溢,防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。
9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。
【儲(chu) 存條件及有效期】
於(yu) 2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(ge) 月。
【生產(chan) 日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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