雞禽流感病毒抗體(ti) 檢測試劑盒(檢血清)
產(chan) 品介紹
雞禽流感病毒抗體(ti) 檢測試劑盒檢測雞血清中的禽流感病毒抗體(ti) ,用於(yu) 評估養(yang) 雞場雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學輔助診斷。
本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板微孔上預包被禽流感抗原。在試驗中,加入稀釋後的待檢血清,經過溫育後,若樣品中含有禽流感特異性抗體(ti) ,則與(yu) 包被板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體(ti) 和其他成分後;加入酶標二抗,與(yu) 檢測板上的抗原抗體(ti) 複合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經酶催化形成藍色產(chan) 物,加入終止液終止反應後,用酶標儀(yi) 450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。
組份
1 | 抗原預包被板條 | 1塊 | 7 | 終止液 | 6ml |
2 | 酶結合物 | 12ml |
| 陰性對照 | 800µl |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50ml |
| 陽性對照 | 800µl |
4 | 底物A液 | 6ml |
| 血清稀釋 | 1塊 |
5 | 底物B液 | 6ml |
| 封板膜 | 2張 |
6 | 樣本稀釋液 | 50ml |
| 說明書(shu) | 1份 |
需自備的設備及試劑
1. 微量移液器: 0.5µl--10µl、10µl--100µl、100µl--1000µl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶標儀(yi) 。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機。
樣品製備
取動物全血,按常規方法製備血清,要求血清清亮,無溶血。
洗滌液的準備
濃縮洗滌液使用前應恢複至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然後用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1:101的體(ti) 積比稀釋待檢血清(例如:200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清)。
注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個(ge) 樣品後都要更換吸頭,準確記錄每個(ge) 樣品在板上的位置。每個(ge) 樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。
注意事項
1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,使用後放回2~8℃。
2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑汙染。
3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。
4. TMB(底物B液)不要暴露於(yu) 強光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測板拆封後應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加幹燥劑放於(yu) 自封袋中,並盡快置於(yu) 2~8℃)。
6. 所有廢棄物在丟(diu) 棄之前應合理處理以免汙染。
7. 嚴(yan) 格遵守操作說明可以獲得h的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精q。
8. 血清稀釋板為(wei) 一次性用品,不得重複使用;血清稀釋板的大容量為(wei) 300μl/孔。
操作步驟
1. 取預包被的檢測板(根據樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔,取陰性及陽性對照各100μl
分別加入反應孔中,空白對照僅(jin) 加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
2. 蓋上封板膜,置37℃溫育30分鍾。
3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗滌液洗3次。每次用洗滌液注滿板孔(約350μl),靜置1分鍾後甩掉。洗滌3次後在幹淨吸水紙上拍幹。
4. 每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鍾。
5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌3次, 方法同2。切記後在幹淨吸水紙上拍幹。
6. 每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鍾。
7. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鍾內(nei) 測定結果。
結果判定
以空白對照調零用酶標儀(yi) 於(yu) 450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大於(yu) 或等於(yu) 0.5,陰性對照孔A450值必須小於(yu) 0.2。如果試驗無效,試驗中的操作值得懷疑,試驗應重做,並仔細檢察各組分。
樣品A450值大於(yu) 0.25+陰性對照孔均值,判為(wei) 陽性;樣品A450值小於(yu) 0.25+陰性對照孔均值,判為(wei) 陰性;如陰性對照孔均值小於(yu) 0.05按0.05計算。
有效期
貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。
有效期: 12個(ge) 月。
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