豬乙型腦炎病毒抗體(ti) (IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)
說明書(shu)
【產(chan) 品名稱】
通用名稱:豬乙型腦炎病毒抗體(ti) (IgG)診斷試劑盒(酶聯免疫法)
英文名稱:Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab
【規格】
96×2測試/盒
【預期用途】
本試劑盒用於(yu) 定性測定豬血清中日本乙型腦炎病毒(又稱流行性乙型腦炎)IgG抗體(ti) 。用於(yu) 評估豬場豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學調查。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理,由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的JEV-IgG結合,再與(yu) 酶標抗豬IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標抗豬IgG抗體(ti) ”複合物,加入顯色劑,通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) JEV-IgG的量成正比,當顯色超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性,表明免疫有效或有自然感染。
【要組成成份】`
1 | JEV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | JEV-IgG陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | JEV-IgG陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
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10 | 說明書(shu) | 1份 |
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【自備器材】
1.酶標儀(yi) ( 450nm 630nm濾光片)
2.微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道 30-300ul)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.一次性槍頭(10ul、200ul)
6.去離子水
【樣本要求】
1.本試劑檢測的樣本為(wei) 豬血清,樣本應無菌采集,2℃~8℃貯存不超過一周,長期應在-20℃以下保存,避免反複凍融。
2.避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌的樣本。
【實驗準備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,先取出置室溫30min。酶標板應在室溫中平衡至潮氣幹盡後方可拆開。
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋(例:將5ul樣本加至195ul樣本稀釋液中)。
3.配製洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現結晶,屬正常現象,放置37℃至溶解後即可。
【操作步驟】
1.加樣:根據樣本數量,取所需板條。設陰、陽性對照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl於(yu) 相應孔中。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔,每孔加入稀釋好的樣本100μl。
2.溫育:加樣後,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鍾。
3.洗板:甩去孔內(nei) 液體(ti) ,用洗滌液注滿反應板孔,洗滌3次,每次停留10秒,後一次洗後拍幹。
4.加酶:每孔加酶標記物100μl。
5.溫育:加好酶標記物後,蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鍾。
6.洗板:同步驟3。
7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應10分鍾。
8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻。終止後即讀數。
9.讀數:以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。
【結果判定】
在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.1。
樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否,或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定,S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD值(0.05以下的數值按0.05計算),PCx(—)表示陽性對照孔平均OD值;
當樣本的S/P≥0.25時判為(wei) 陽性;樣品S/P值<0.25時判為(wei) 陰性。
【注意事項】
1.本試劑盒僅(jin) 用供研究使用。
2.使用試劑盒之前,一定要仔細閱讀說明書(shu) 。
3.實驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鍾,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鍾後廢棄。
4.未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封4℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋,與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2℃-8℃避光保存。不同批號的試劑組份不可混用。
5.應用微量移液器加入樣本及試劑,並經常校對其準確性。
6.加洗滌液時應做到滿而不溢,防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。
7.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。
【儲(chu) 存條件及有效期】
於(yu) 2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(ge) 月。
【生產(chan) 日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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