豬偽(wei) 狂犬 gE 抗體(ti) ELISA 檢測試劑盒說明書(shu)
【產(chan) 品名稱】
英文名稱:ELISA Kit for detection of antibody against Pseudorabies virus gE glycoprotein
【規格】
96T×2/盒
【作用與(yu) 用途】
測定豬血清中豬偽(wei) 狂犬 gE 抗體(ti) ,用於(yu) 偽(wei) 狂犬病毒gE 基因缺失疫苗免疫豬與(yu) 自然感染豬的鑒別診斷
【自備器材】
1.酶標儀(yi) ,雙波長 450/630nm 濾光片
2.精q的微量移液器(單道 1-100μl、0.5-10μl、多道 30-300μl)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.洗液吸移裝置
6.一次性槍頭(10μl,200μl)
7.去離子水
【主要組成成份】
1 | PRV-gE 抗原包被板 | 96T×2 |
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2 | 酶標記物 | 22ml | 黃色帽 |
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3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
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4 | PRV-gE-IgG 陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
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5 | PRV-gE-IgG 陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
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6 | 顯色劑 | 12ml*2 | 橙色帽 |
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7 | 終止液 | 12ml | 藍色帽 |
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8 | 20X 濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
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9 | 蓋板膜 | 2 張 |
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10 | 說明書(shu) | 1 份 |
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【樣本要求】
1.本試劑檢測的樣本為(wei) 豬血清,樣本應無菌采集,2℃~8℃貯存應不超過一周,長期應在-20℃以下保存。
【實驗準備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,先取出置室溫 30min,可以獲得J結果。
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作 40 倍稀釋(即:5μl 血清加 195μl 樣品稀釋液),混合均勻。
3.陽性對照陰性對照稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將陽性對照血清和陰性對照血清作4倍稀釋(即:50μl血清加150μl樣本稀釋液),混合均勻。
4.配製洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋 20 倍(即 1ml 濃縮洗滌液加 19ml 水),即可使用。注意:使用前要使結晶*溶解。
【檢驗方法】
1.加樣:根據樣本數量,取所需板條,檢測時,設陰、陽性對照各 2 孔,分別加入稀釋後的陰、陽性對照血清 100μl 於(yu) 相應孔中。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔,每孔加 100μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗)。
2.溫育:加樣後,蓋上蓋板膜,置 37℃溫育 30 分鍾。
3.洗板:甩去孔內(nei) 液體(ti) ,用洗滌液注滿反
應板孔,靜置 10 秒甩出,洗滌 3 次,後
一次洗滌後在吸水紙上拍幹。
4.加酶:每孔加酶標記物 100μl。
5.溫育:加好酶標記物的反應板蓋好蓋板
膜,置 37℃溫育 30 分鍾。
6.洗板:同步驟 3。
7.顯色:每孔加顯色劑 100μl,振蕩混勻,
37℃避光反應 10 分鍾。
8.終止:每孔加終止液 50μl,振蕩 10 秒,
充分混勻,終止後即讀數。
9.讀數:以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD 值)。
【結果判定】
在酶標儀(yi) 上測各孔的 OD 值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均 OD 值≥0.5,陰性對照孔的平均 OD 值必須<0.1;樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否,或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由 S/P 值決(jue) 定,S/P 值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本 OD450/630 值-NCx)/(PCx-NCx),
其中 NCx表示陰性對照孔平均 OD450/630 值
(0.05 以下的數值按 0.05 計算);PCx表示陽性對照孔平均 OD450/630 值;
當樣本的 S/P≥0. 25時判為(wei) 陽性;樣品 S/P 值<0.25時判為(wei) 陰性;
【注意事項】
1.本試劑盒僅(jin) 供研究使用。
2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不同
批次的組分混合使用。
3.使用試劑盒之前,一定要仔細閱讀說明書(shu) 。
4.使用前,濃縮的洗滌液應恢複至室溫
(20~25℃),並搖動使沉澱溶解(hao在
37℃水浴鍋中加熱5~10分鍾),然後用去離
子水作 20倍稀釋(例如:50ml的濃縮洗滌液
加上 950ml 蒸餾水),混勻,稀釋好的洗滌
液在 2~8℃可以存放 7-10 日。
5.本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待,試驗廢棄物應經 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鍾,或5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鍾後廢棄。
6.微孔板從(cong) 冷藏環境中取出時應在室溫中平
衡至潮氣幹盡後方可拆開,未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封 2℃-8℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋,與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2℃-8℃避光保存。
7.應用微量移液器加入樣本及試劑,並經常
校對其準確性。
8.加洗滌液時應做到滿而不溢,防止孔口有
遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。
9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應
立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。
【儲(chu) 存條件及有效期】
於(yu) 2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有期
12 個(ge) 月。
【生產(chan) 日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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豬乙型腦炎抗體(ti) 檢測試劑盒
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高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測
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