DIGE技術實驗服務
實驗技術簡介:
DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE),是在傳(chuan) 統雙向電泳的基礎上發展而來的新型蛋白質組學定量技術,其分離蛋白質混合的原理與(yu) 雙向電泳是一致的, 主要利用蛋白質的等電點和分子量的差異來分離蛋白質混合物,同時應用熒光染料的靈敏度及內(nei) 標的使用等技術,使其在定量蛋白質組學的研究中效果明顯優(you) 於(yu) 傳(chuan) 統雙向電泳。DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們(men) 能與(yu) 蛋白質的賴氨酸側(ce) 鏈氨基反應而使蛋白質被標記,被標記蛋白質的等電點和分子量幾乎不受影響,等量混合標記好的蛋白質後進行雙向電泳,不同凝膠之間可以通過cy2內(nei) 標匹配,消除凝膠之間的差異,蛋白質表達量的變化則通過cy3和cy5不同熒光的強度來體(ti) 現。
與(yu) 常規雙向電泳後,銀染或考染膠相比,DIGE具有以下優(you) 勢:
1、靈敏度高,di可檢測到125pg的蛋白質;
2、高效性,同一塊凝膠上可以電泳兩(liang) 個(ge) 樣品,減輕了工作量;
3、線性範圍更廣,動態範圍高達10-5;
4、定量精que,采用內(nei) 標消除了凝膠與(yu) 凝膠之間的實驗誤差,顯著提高了實驗的精que度和可重複性;
5、統計學分析,ImageMaster7.0 (DIGE) 軟件可以得到統計學可信的結果,降低了操作者之間的偏差。
DIGE技術服務流程
DIGE技術服務內(nei) 容
1、樣本製備與(yu) 定量; .
2、熒光標記;
3、雙向電泳和圖片分析;
4、DIGE實驗報告提交。
送樣須知:
1、技術谘詢:在您開展實驗之前,本公司將為(wei) 您竭誠提供有效的DIGE實驗設計方案。
2、為(wei) 了保證DIGE實驗能順利進行,樣品須液氮或幹冰保存寄送,
注:樣本應避免各類汙染和反複凍融。
實驗報告內(nei) :
1、DIGE熒光電子圖片;
2、蛋白質點定量分析結果,包括差異點號碼、差異倍數、pI和MW等;
3、完整實驗報告,包括實驗步驟、使用儀(yi) 器、軟件檢索參數等。
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