| 更新時間： | 2025-02-18 |
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| 廠商性質： | 生產廠家 |
蛋白雙向 電泳實驗服務提供商：上海研謹生物/杭州研謹生物服務名稱：蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務規格：實驗服務 價(jia) 格：500元收費標準/服務周期/提供結果:歡迎谘詢詳談，我們(men) 會(hui) 根據您的方案及需求製定詳細的服務協議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內(nei) 容,或來電詳詢!
一、蛋白雙向 電泳實驗服務實驗技術簡介
2D-WB是雙向電泳與(yu) 傳(chuan) 統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為(wei) 抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離,然後將凝膠蛋白轉印至支持膜上，再通過抗體(ti) 雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化，在蛋白翻譯後修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術，可以從(cong) 蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。
二、蛋白雙向 電泳實驗服務概述
2D-WB是雙向電泳與(yu) 傳(chuan) 統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為(wei) 抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離，然後將凝膠蛋白轉印至支持膜上，再通過抗體(ti) 雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化，在蛋白翻譯後修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術，可以從(cong) 蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。
三、服務內(nei) 容
1、蛋白質抽提與(yu) 定量;
2、雙向電泳;
3、轉膜，封閉，孵育,顯示成像。
四、實驗操作流程
1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡，第二項電泳SDS-APGE.
2、第二項電泳結束後，取出凝膠進行轉膜，轉膜方法可選擇濕法轉移和半幹法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
3、封閉，5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。
4、一抗孵育,根據抗體(ti) 說明書(shu) 選擇孵育時間，常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜，一抗孵育後取出膜
TBST洗滌3次，每次5分鍾。
5、二抗孵育:根據一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等)，室溫孵育1小時後取出膜TBST洗滌3次,每次5分鍾。
6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混台均勻後滴在膜上，暗室中將膠片置於(yu) 膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間後將膠片放入顯影液中進行顯影，直到出現清晰的蛋白質條帶，清水漂洗一下後在定影液中定影， 曝光時間需綜台考慮蛋白質的上樣量，抗體(ti) 稀釋濃度，抗體(ti) 孵育時間等因素。
7、定影後，清洗膠片，晾幹，標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。
送樣須知，為(wei) 了保證2D Western blot技術服務能順利進行,樣品寄送需滿足以下要求:
1、顧客提供:組織、細胞、蛋白質溶液等; 一抗(可交由研謹公司代購)。
2、運輸要求:幹冰或液氮包裝寄送。
注:樣本應避免各類汙染和反複凍融。
五、技術服務報告內(nei) 容
1、蛋白質定量結果及電泳上樣量;
2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;
3、2D Western blot完整的實驗報告，包括實驗步驟、使用儀(yi) 器和試劑等。
附: 2D Western blot實驗步驟
1、2D Western blot蛋白質樣本製備,製備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質，破壞蛋白質與(yu) 蛋白質間的相互作用，避免各類幹擾物質，樣品製備與(yu) IEF兼容等。
2、雙向電泳的主要步驟，第-項電(IEF) ，膠條平衡，第二項電泳SDS-APGE.
3、第二項電泳結束後，取出凝膠進行轉膜，轉膜方法可選擇濕法轉移和半幹法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
4、封閉， 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。
5、-抗孵育,根據抗體(ti) 說明書(shu) 選擇孵育時間，常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜，一 抗孵育後取出膜TBST洗滌3次，每次5分鍾。
6、二抗孵育:根據-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等)， 室溫孵育1小時後取出膜TBST洗滌3次，每次5分鍾。
7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻後滴在膜上,暗室中將膠片置於(yu) 膜上，蓋上壓片夾，曝光一定時間後將膠片放入顯影液中進行顯影，直到出現清晰的蛋白質條帶，清水漂洗一下後在定影液中定影， 曝光時間需綜合考慮蛋白質的.上樣量，抗體(ti) 稀釋濃度，抗體(ti) 孵育時間等因素。
8、定影後，清洗膠片，晾幹，標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。
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