| 更新時間： | 2025-02-18 |
| 訪問量： | 3720 |
| 廠商性質： | 生產廠家 |
高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，是針對豬藍耳病毒設計的檢測體(ti) 係，用於(yu) 豬血清和組織等樣本的檢測。
高致病性豬藍耳病病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒
前言
本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，是針對豬藍耳病毒設計的檢測體(ti) 係，用於(yu) 豬血清和組織等樣本的檢測。
試劑盒組成成分
組成成份（48Tests/kit） | 規格 |
核酸擴增試劑 |
|
RT-PCR反應液 | 994.5µl×1管 |
Taq酶(5U/µl) | 15.5µl×1管 |
Enhancer | 10.5µl×1管 |
對照品 |
|
陰性對照 | 25µl×1管 |
陽性對照 | 25µl×1管 |
儲(chu) 存條件及有效期
本試劑盒貯存於(yu) -20℃的條件下有效期為(wei) 6個(ge) 月。
適用儀(yi) 器(熒光PCR檢測儀(yi) )
Ø ABI公司Prism7000、7300、7500係列
Ø RotorGene係列
Ø Bio-Rad公司的iCycler係列
【自備試劑】
核酸提取試劑。
【樣本采集、存放及運輸】
1．樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集。
2．存放：分離後的血清或血漿樣本在2℃—8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反複凍融（多凍融3次）。
3．運輸：采用冰hu或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【檢驗方法】
1．樣本處理（樣本處理區）：
用戶可采用病毒RNA提取試劑盒提取RNA用於(yu) 檢測或保存與(yu) -20℃（-80℃更佳）以待檢測。說明：陽性對照及陰性對照無需提取，直接上樣。
2．擴增試劑準備（PCR前準備區）：
從(cong) 試劑盒中取出RT-PCR 反應液、Taq酶及PCR Enhancer，室溫融化並振蕩混勻後，2000rpm離心10秒。設所需要的PCR反應管管數為(wei) n（n = 樣本數 + 1管陰性對照 + 1管陽性對照），每個(ge) 測試反應體(ti) 係配製如下表：
試劑 | RT-PCR反應液 | Taq酶 | PCR enchancer |
用量 | 19.5 µl | 0.3ul | 0.2 µl |
計算好各試劑的使用量，加入一適當體(ti) 積離心管中，充分混合均勻，2000rpm離心10秒，向設定的n個(ge) PCR反應管中分別加入20 µl，轉移至樣本處理區。
3．加樣（樣本處理區）：
向所設定的n個(ge) PCR 反應管中分別加入待檢樣本RNA、陰性對照和陽性對照各5µl，蓋緊管蓋，轉移至檢測區。將PCR反應管排好放入PCR儀(yi) 內(nei) ，記錄樣本擺放順序。
4．PCR擴增（檢測區）
4.1 循環條件設置
50℃：30 min；
95℃：3 min；
95℃：10 sec, 60℃: 1min 40個(ge) 循環。
熒光信號收集設在60℃。反應體(ti) 係設為(wei) 25ul。
4.2 儀(yi) 器檢測通道選擇
待測熒光為(wei) FAM熒光素，熒光PCR檢測儀(yi) 熒光信號收集設定為(wei) FAM熒光素。
5．結果分析條件設定：
5.1 閾值(threshold)設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照曲線（無規則的噪音線）的高點為(wei) 準。
5.2 基線（baseline）應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（循環數）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（循環數）應比早出現指數擴增的樣本Ct值減少1-2個(ge) 循環。
注：具體(ti) 設置方法請參照各儀(yi) 器使用說明書(shu) 。
6．質控標準：
陰性對照的檢測結果應為(wei) 陰性；
陽性對照的Ct值應小於(yu) 等於(yu) 32.0。
1．結果判斷：
Ø Ct值無讀數的樣本為(wei) 陰性。
Ø Ct值≤38.0的樣本為(wei) 陽性。
Ø Ct值大於(yu) 38.0的樣本建議重做。
重做結果Ct值＜40.0為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。
【試劑盒使用注意事項】
1. 有關(guan) 實驗室管理規範請嚴(yan) 格按照行業(ye) 行政主管部門頒布的有關(guan) 基因擴增檢驗實驗室的管理規範執行。
2. 本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 體(ti) 外檢測。
3. 實驗請嚴(yan) 格分區操作：
*區：PCR前準備區——準備擴增所需試劑；
第二區：樣本處理區——待測樣本和對照品處理；
第三區：檢測區——PCR擴增檢測。
4. 各區物品均為(wei) ，不得交叉使用，避免汙染，實驗後即請清潔工作台。
5. 試劑盒內(nei) 各試劑使用前，充分融化後請稍事離心。
6. 在－20℃保存的樣本裂解產(chan) 物，應在加樣前置室溫解凍，作短暫離心後使用。
7. 分裝有反應液的反應管應扣蓋或裝入密實袋內(nei) 再轉移至樣本區。
8. 加樣時應使樣品*落入反應液中，不應有樣品粘附於(yu) 管壁上，加樣後應盡快蓋緊管蓋。
9. 擴增完畢立即取出反應管，密封在塑料袋內(nei) ，丟(diu) 棄於(yu) 地點。
10. 反應液分裝時應盡量避免產(chan) 生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免熒光物質泄露汙染儀(yi) 器。
11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nei) ，並與(yu) 其他廢棄物品一同滅菌後丟(diu) 棄。
12. 工作台及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進行消毒。
1．結果判斷：
Ø Ct值無讀數的樣本為(wei) 陰性。
Ø Ct值≤38.0的樣本為(wei) 陽性。
Ø Ct值大於(yu) 38.0的樣本建議重做。
重做結果Ct值＜40.0為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。
【試劑盒使用注意事項】
1. 有關(guan) 實驗室管理規範請嚴(yan) 格按照行業(ye) 行政主管部門頒布的有關(guan) 基因擴增檢驗實驗室的管理規範執行。
2. 本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 體(ti) 外檢測。
3. 實驗請嚴(yan) 格分區操作：
*區：PCR前準備區——準備擴增所需試劑；
第二區：樣本處理區——待測樣本和對照品處理；
第三區：檢測區——PCR擴增檢測。
4. 各區物品均為(wei) ，不得交叉使用，避免汙染，實驗後即請清潔工作台。
5. 試劑盒內(nei) 各試劑使用前，充分融化後請稍事離心。
6. 在－20℃保存的樣本裂解產(chan) 物，應在加樣前置室溫解凍，作短暫離心後使用。
7. 分裝有反應液的反應管應扣蓋或裝入密實袋內(nei) 再轉移至樣本區。
8. 加樣時應使樣品*落入反應液中，不應有樣品粘附於(yu) 管壁上，加樣後應盡快蓋緊管蓋。
9. 擴增完畢立即取出反應管，密封在塑料袋內(nei) ，丟(diu) 棄於(yu) 地點。
10. 反應液分裝時應盡量避免產(chan) 生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免熒光物質泄露汙染儀(yi) 器。
11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nei) ，並與(yu) 其他廢棄物品一同滅菌後丟(diu) 棄。
卡那黴素快速檢測試紙條
豬瘟病毒阻斷ELISA抗體(ti) 檢測試劑盒
