| 更新時間： | 2025-02-17 |
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| 廠商性質： | 生產廠家 |
RT-PCR技術服務1、引物設計合成（人、大鼠、小鼠、兔等）2、基因表達水平檢測、內(nei) 參檢測3、SNP檢測服務4、甲基化檢測服務5、測序技術服務6、芯片檢測（全基因、MicroRNA）7、染色體(ti) 分析
反轉錄PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一種從(cong) RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對於(yu) 獲得與(yu) 克隆mRNA的5’、3’末端序列和從(cong) 非常少量的mRNA樣品構建大容量的cDNA文庫方麵都是極為(wei) 靈敏與(yu) 通用的方法。此外，RT-PCR還易於(yu) 鑒定已轉錄序列是否發生突變及呈現多態性，還可用於(yu) 測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法，可滿足客戶不同的實驗要求。
樣品要求：提供的樣品要新鮮並盡可能多，不推薦提供RNA樣品，或者提供cDNA，並盡可能詳細的提供背景資料（基因序列、Genebank accession number擴增產(chan) 物的用途等）。
RT-PCR技術服務?基本步驟：
● 模板製備：見RNA提取技術服務。
● 引物設計
客戶提供上、下遊引物，或者我公司提供免費的引物設計及合成（包括RT-PCR半定量檢測中的內(nei) 參引物）。
● 反轉錄
（1）Microtube管中配製下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。
| 試劑名稱 | 使用量 |
| 模板RNA | 2μg |
| Oligo（dT）12-18 Primer（50μM） | 2.5μl |
（2）70℃保溫5分鍾後迅速在冰上急冷2分鍾以上。
（3）離心數秒鍾使模板RNA/引物的變性溶液聚集於(yu) Microtube管底部。
（4）在上述Microtube管中配製下列反轉錄反應液。
| 試劑名稱 | 使用量 |
| 上述模板RNA/引物變性溶液 | |
| 5×M-MLV Buffer | 5μl |
| dNTP Mixture（各10 mM） | 1.25μl |
| RNase Inhibitor（40 U/μl ） | 25U |
| M-MLV（200 U/μl ） | 200U |
| RNase free dH2O | up to 25μl |
42℃保溫1小時。
（5）70℃保溫15分鍾後冰上冷卻，得到cDNA溶液。
若需要表達，參考基因表達服務。若需要進行RT-PCR半定量分析，接著以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴增目的基因及看家基因，產(chan) 物經過瓊脂糖凝膠電泳後進行灰度掃描分析。
RNA模板的製備需另收費（見RNA提取服務）以上為(wei) 1個(ge) 目的基因的報價(jia) 。進行相對定量分析時，同一材料的多個(ge) 目的基因的價(jia) 格=1個(ge) 目的基因價(jia) 格×目的基因個(ge) 數。
提供結果
完整的實驗操作步驟、電泳圖、定量分析結果等。
RT-PCR技術服務參照：
