ELISA法

光度酶聯免疫分析常被稱為(wei) ELISA法，即酶聯免疫吸附分析。它zui早由Engvall和Perlmann與(yu) Van Weeman和Schuurs同時建立，並用於(yu) 醫學研究。它利用酶標記物同抗原抗體(ti) 複合物的免疫反應與(yu) 酶的催化放大作用相結合，既保持了酶催化反應的敏感性，又保持了抗原抗體(ti) 反應的特異性，因而極大地提高了靈敏度。同時它又是一種非均相分析，即在反應中的每一步都有洗滌過程，從(cong) 而除去了未反應物質和幹擾物質。

ELISA是將抗原、抗體(ti) 的免疫反應和酶的催化反應有機結合而發展起來的一種綜合性技術。它的基本原理是：使抗原或抗體(ti) 結合到某種固相載體(ti) 表麵，並保持其免疫活性；抗原或抗體(ti) 與(yu) 某種酶聯結成美標抗原或抗體(ti) ，這種酶標抗原或抗體(ti) 即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，使受檢標本和酶標抗原或抗體(ti) 按不同的步驟與(yu) 固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 起反應。用洗滌的方法使固相載體(ti) 上形成的抗原抗體(ti) 複合物與(yu) 其他物質分開，zui後結合在固相載體(ti) 上的酶量與(yu) 標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化變為(wei) 有色產(chan) 物，產(chan) 物的量與(yu) 標本中受檢物質的量直接相關(guan) ，故可根據顏色產(chan) 反應的深淺進行定性分析或定量分析。由於(yu) 酶的催化效率很高，往往一分子酶在1min內(nei) 可催化數十萬(wan) 及至上千萬(wan) 分子底物變為(wei) 產(chan) 物，故可極大地放大反應信號，從(cong) 而使測定方法達到很高的靈敏度。從(cong) 以上的原理可知，整個(ge) ELISA試驗可分為(wei) 三個(ge) 部分：一是免疫學反應過程，包括抗原、抗體(ti) 、酶標記物之間的反應；二是酶和底物反應過程，可以使用不同的酶/底物係統；三是檢測方法的建立，可以利用已經存在的各種分析手段，對酶催化反應產(chan) 生的產(chan) 物進行定量分析，根據產(chan) 物的理化性質，可采用分光光度法，也可采用熒光分析法、化學發光分析法、電化學分析法等分析方法。

N-US> pn�� �� yle='font-family:宋體(ti) ;mso-ascii-font-family:"Times New Roman"; mso-hansi-font-family:"Times New Roman"'>或”酶標定量測試儀(yi) ”,其實這是不確切的,因為(wei) 在學術上”酶標”是指用一定的方式,使酶與(yu) 抗體(ti) (或抗原)蛋白質結合的過程.

 一,ELISA測試儀(yi) 的使用方法:應將ELISA測試儀(yi) 安裝於(yu) 溫度,濕度相對穩定的幹燥,清潔,安靜的實驗室裏,電源電壓可用交流電.使用時分校正儀(yi) 器,測試樣品,清洗比色皿三個(ge) 環節.

   校正儀(yi) 器:1,關(guan) 上光門,插入所需之濾光片,並將量程選擇開關(guan) 轉到T”100%”處.2,接通電源,可見指示燈亮.3,預熱15min以上.4,將儀(yi) 器由調”0”開關(guan) 調到表頭指針為(wei) 0.5,注入對照液,打開光門,調光量旋鈕使表頭指針為(wei) 100%滿度.6,將量程轉到所需的A(光密度)量程範圍,用A旋鈕調至0.

測定樣品:1,安上抽液泵按鈕,抽去對照液.2,放下按鈕開關(guan) ,用微量移液管(又叫微量液體(ti) 取樣器)注入樣品,即可讀數,樣品測試程序由稀到濃.

清洗比色皿:開啟抽液泵,清洗比色皿3次以上,才可測試不同組分的樣品

二,與(yu) ELISA測試儀(yi) 測定有關(guan) 的輔助用具:ELISA測定中,其他有關(guan) 的輔助用具有聚苯一乙烯塑料微量反應板和微量液體(ti) 取樣器.20世紀80年代,聚苯乙烯塑料微量反應板由上海塑料製品三廠生產(chan) ,不同體(ti) 積量的微量液體(ti) 取樣器,由上海求精玻璃儀(yi) 器廠等廠家生產(chan) .聚苯乙烯塑料微量反應板質量與(yu) ELISA測試結果關(guan) 係很大,尤其在使用四川第九儀(yi) 表廠生產(chan) 的ELISA測試儀(yi) 時更為(wei) 突出.

   21世紀隨著科學技術的飛躍發展,ELISA測試儀(yi) 的性能和外觀都發生了較大的變化.