遊離脂肪酸（FFA）含量檢測試劑盒說明書(shu)

可見分光光度法

注意：正式測定前務必取 2-3 個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定。

規格：50T/48S

產(chan) 品內(nei) 容：

提取液：液體(ti) 50 mL×1 瓶，室溫保存。

試劑一：自備。實驗前一天，取一個(ge) 玻璃瓶，按照正庚烷：無水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自備），蓋緊後混勻，室溫保存。

試劑二：液體(ti) 16 mL×1 瓶，室溫保存。

試劑三：粉劑×2 瓶，4℃保存。臨(lin) 用前每瓶加入 32mL 無水乙醇充分溶解，4℃可保存一周。標準品：粉劑×1 支，10mg 棕櫚酸，室溫保存。臨(lin) 用前把試劑轉移到 10 mL 玻璃瓶中，加入

7.8 mL 氯仿充分溶解，即為(wei) 5μmol/mL 的棕櫚酸標準溶液。

產(chan) 品說明：

FFA 既是脂肪水解的產(chan) 物，又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的濃度與(yu) 脂類代謝、糖代謝、內(nei) 分泌功能有關(guan) 。

FFA 與(yu) 銅離子結合形成脂肪酸銅鹽，並溶於(yu) 氯仿；利用銅試劑法測定銅離子含量，即可推算出遊離脂肪酸含量。

自備儀(yi) 器和用品：

研缽、冰、台式離心機、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、一個(ge) 40mL 玻璃瓶、一個(ge) 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、無水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、無水乙醇和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品中 FFA 提取：

1、血清中FFA 測定：將所取血液，室溫靜置 1 h 後，於(yu) 4 ℃離心機 3500 rpm 離心 15min，取上層血清置於(yu) -20℃冰箱保存，待測。

2、組織中 FFA 含量測定：組織用生理鹽水衝(chong) 洗幹淨後，用吸水紙吸取表麵水分，稱取約 0.1g，加入 1.0 mL 提取液，勻漿後，8000rpm，4℃離心 10min，取上清液，待測。

二、測定：

1.分光光度計預熱 30 min 以上，調節波長到 550 nm，無水乙醇調零。

2.試劑二在 37℃水浴中預熱 30 min 以上。

3.標準品的稀釋：將標準品用氯仿稀釋成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL。

4.按下表在 1.5mL 離心管中加入相應試劑

對照管測定管空白管標準管

蒸餾水（μL）50

樣本（μL）50

氯仿（μL）50

標準品（μL）50

試劑一（μL）500

試劑二（μL）200

充分振蕩 10min 後，3000rpm，離心 10min

上層溶液（μL）200

試劑三（μL）800

充分振蕩 2min 後，靜置 15min，於(yu) 550 nm 下測吸光值，分別記為(wei) A 對照管、A 測定管、A 空白管、A 標準管。（對照管和空白管各隻做一管）

三、FFA 含量計算：

1.標準曲線的繪製：

以標準溶液的濃度為(wei) x 軸，以ΔA 標準（ΔA=A 標準管-A 空白管）為(wei) y 軸，繪製標準曲線，得到方程 y=kx+b。將ΔA（ΔA=A 測定管-A 對照管）帶入方程得到 x。

2.血清中 FFA 含量計算

FFA（μmol/L）=1000x

3.組織中 FFA 含量計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

FFA 含量（μmol/mg prot）=x×V 樣總÷（Cpr×V 樣總）=x÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

FFA（μmol/g 鮮重）=x×V 樣總÷W

V 樣總：上清液總體(ti) 積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品鮮重，g。1000：單位換算係數，1L=1000mL。

注意事項：

(1)試劑三配製應盡量晚配，可在操作到加入試劑二時，再配製試劑三。

(2)必須保證每管的震蕩頻率及時間一致。

(3)盡量在 30min 內(nei) 完成測量，並且測完後要密封好再丟(diu) 棄。

(4)因所用試劑多數為(wei) 有機溶劑，同一支吸頭多次吸取會(hui) 造成體(ti) 積不準確，建議更換吸頭。

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