土壤過氧化氫酶 （Solid- Catalase    S- CAT）試劑盒說明書(shu)  

微量法

注意：正式測定前務必取2-3 個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

規格 ： 100T/48S

產(chan) 品內(nei) 容：

試劑一：液體(ti) × 1  瓶，4℃保存； 臨(lin) 用前加入29 .7mL  蒸餾水充分溶解後待用；用不完的試劑4℃ 保存；

試劑二：粉劑× 1  瓶，4℃保存；臨(lin) 用前加入1mL  蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存； 試劑三：液體(ti) × 1  瓶，4℃保存。

產(chan) 品說明：

S-CAT  是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2 清除係統中具有重要作用。

H2O2   在240nm  下有特征吸收峰，通過測定與(yu) 土壤反應後溶液在此波長下吸光度的變化，即可 反應S-CAT  活性的高低。

需自備的儀(yi) 器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸餾水

操作步驟：

-、     樣品處理：

新鮮土樣自然風幹或 37  度烘箱風幹，過 30~50   目篩。

、   測定步驟：

1 、  分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min 以上，調節波長至240nm ，蒸餾水調零。

2 、 加樣表

試劑名稱測定管無基質管無土管

風幹土樣 (g)0.030.03

試劑一 (μL)260260

雙蒸水 (μL)260

25℃振蕩培養(yang) 20min

試劑二 (μL)101010

混勻 8000g ，25℃離心 5min ，取全部上清

試劑三 (μL)303030

混勻，取200uL  至微量石英比色皿或96  孔板中，240nm  處記錄各管吸光值A。 注意：  每個(ge) 測定管要設一個(ge) 無基質管，無土管隻要做一管。

三、      S-CAT 活性計算：

A 、用微量石英比色皿測定的計算公式如下

單位的定義(yi) ：每天每g  風幹土樣催化1μmol H2O2   降解定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

計算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  無土管-A  測定管+A 無基質管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 ×   (A  無土管-A  測定管+A 無基質管)

V  反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，3 × 10-4 L ；ε  ：過氧化氫摩爾消光係數，4.36× 104 L / mol /cm；d： 比

色皿光徑，1cm；  T ：反應時間，20 min= 1/72d；  W：樣本質量，0.03g。

B 、用96 孔板測定的計算公式如下

單位的定義(yi) ：每天每g  風幹土樣催化1μmol H2O2   降解定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

計算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  無土管-A  測定管+A 無基質管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 ×   (A  無土管－A  測定管+A  無基質管)

V  反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，3 × 10-4 L ；ε ：過氧化氫摩爾消光係數，4.36× 104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；  T ：反應時間，20 min= 1/72d；  W：樣品質量，0.03g。

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