炭疽杆菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

【產(chan) 品名稱】

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反

應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

通用名稱：炭疽杆菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

Name

：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

4  擴增（核酸擴增區）

4.1 將待檢測反應管置於(yu) 熒光定量  PCR  儀(yi) 反應槽內(nei) ；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體(ti) 係設置為(wei) 25μL；

熒光通道選擇：  檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 係列儀(yi) 器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None  即可。

【包裝規格】48T/盒

【預期用途】

炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一種人獸(shou) 共患病。BA

在環境中形成芽孢，可長期、穩定地存在於(yu) 自然界中。由於(yu) BA  的穩定性及其致

病性，易引發突發公共衛生事件。目前的 BA  檢測方法主要基於(yu) 病原體(ti) 的培養(yang) 、染色

鏡檢、血清學檢測等，但這些方法均不適合早期的快速偵(zhen) 檢。基於(yu) 核酸檢測的熒光-PCR

技術，因其靈敏度高、操作簡單、特異性好，可快速檢測炭疽病原，及時控製炭疽疫

4.3  推薦循環參數設置：

步驟

循環數

溫度

95℃

94℃

55℃

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

10min

15sec

30sec

否

否

是

情

[1]

。

2

40 cycles

本試劑盒適用於(yu) 檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽杆菌，用於(yu)

炭疽杆菌感染的輔助診斷。

5  結果分析判定

6.1結果分析條件設定

【檢驗原理】

[2-3]

，用熒光 PCR  技術對炭疽

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現

整體(ti) 傾(qing) 斜時，根據分析後圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15  範圍內(nei) 調

節)、stop 值(一般可在 5~20 範圍內(nei) 調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動

閾值線至高於(yu) 陰性對照)，重新分析結果。

本試劑對炭疽杆菌特異性基因設計引物和熒光探針

杆菌的核酸進行體(ti) 外擴增檢測，用於(yu) 臨(lin) 床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

名

稱

格

7結果判斷

核酸提取液

酶液

1.5mL×2  管

50μL×1 管

1.0mL×1 管

50μL×1 管

250μL×1 管

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，丏曲線有明顯的指數增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，丏出現明顯擴增曲線的樣本建議重複試驗，重複試

驗結果出現 Ct 值≤35.0  和明顯擴增曲線者為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。

陰性：樣本檢測結果無 Ct  值丏無明顯的擴增曲線。

BA  反應液

BA  陽性質控品

陰性質控品

8 檢測方法的局限性

注：

1）不同批號試劑不能混用。

Ø  樣本檢測結果不樣本收集、處理、運送以及保存質量有關(guan) ；

Ø  樣本提取過程中沒有控製好交叉汙染，會(hui) 出現假陽性結果；

Ø  陽性對照、擴增產(chan) 物泄漏，會(hui) 導致假陽性結果；

Ø  病原體(ti) 在流行過程中基因突變、重組，會(hui) 導致假陰性結果；

Ø  不同的提取方法存在提取效率差異，會(hui) 導致假陰性結果；

Ø  試劑運輸，保存不當或試劑配製不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定

量檢測不準確的結果；

2）試劑盒內(nei) 各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。

【儲(chu) 存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反複凍融數不超過 5 次，有效期 12  個(ge) 月。

【適用儀(yi) 器】

ABI  、安捷倫(lun) MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf  等係列

熒光定量 PCR  檢測儀(yi) 。

Ø  本檢測結果僅(jin) 供參考，如須確診請結合臨(lin) 床症狀以及其他檢測手段。

9.  質控標準

【標本采集】

陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct  值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，丏 Ct  值≤32；

以上條件應同時滿足，否則實驗視為(wei) 無效。

皮膚炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子標本，放入標本采集管中；腸炭

疽，取糞便  1g

【保存和運輸】

上述標本短期內(nei) 可保存於(yu) -20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6  個(ge) 月，標本

運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴(yan) 禁反複凍融。

【注意事項】

Ø  所有操作嚴(yan) 格按照說明書(shu) 進行；

Ø 試劑盒內(nei) 各種組分使用前應自然融化，*混勻並短暫離心；

Ø  反應液應避光保存；

【使用方法】

1.  樣品處理（樣本處理區）

Ø 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

Ø  使用一次性吸頭、一次性手套和各區與(yu) 用工作服；

Ø 樣本處理、試劑配製、加樣需在不同區進行，以免交叉汙染；

Ø 實驗完畢後用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作台和移液器；

Ø  試劑盒裏所有物品應視為(wei) 汙染物對待，並按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通

則》進行處理。