總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）試劑盒說明書(shu)

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。

研究意義(yi) ：

測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體(ti) 液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測定原理：

在酸性環境下，還原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)產(chan) 生藍色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1 瓶，使用前預冷。

試劑一：液體(ti) 15mL×1 瓶，避光保存。

試劑二：液體(ti) 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體(ti) 1.5mL×1 瓶，避光保存。

混合液(現配現用)：將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合，使用前37℃預溫。

樣品的製備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體(ti) 樣品

血漿（製備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用於(yu) 測定，也可以-80℃凍存（不宜超30d）後再測定。

(2) 組織樣品

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然後10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

(3) 細胞樣品

按照細胞數量（10⁴個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1的比例（建議500萬(wan) 細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔10s，重複30次）；10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

操作步驟：

1、分光光度計/酶標儀(yi) 預熱30min，調節波長至593nm，蒸餾水調零。

2、操作表

注意：空白管隻需測定一次。

總抗氧化能力計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.6308x+0.1291，R²=0.9989

（1）按樣本質量計算

總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷ 0.6308×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=53.9×（△A-0.1291）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=53.9×（△A-0.1291）÷Cpr

（3）按細胞計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）

（4）按液體(ti) 體(ti) 積計算

總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷V 樣= 53.9×（△A-0.1291）

V 樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL； V 反總：反應總體(ti) 積，204μL；V 樣：反應中樣品體(ti) 積，

6μL；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.3154x+0.1291；R²=0.9989

（1）按樣本質量計算

總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=107.8×（△A-0.1291）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=107.8×（△A-0.1291）÷Cpr

(3) 按細胞計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）= 107.8×（△A-0.1291）÷ 細胞數量（萬(wan) 個(ge) ）

（4）按液體(ti) 體(ti) 積計算

總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷V 樣= 107.8×（△A-0.1291）

V 樣總：加入提取液體(ti) 積，1 mL； V 反總：反應總體(ti) 積，204μL；V 樣：反應中樣品體(ti) 積，

6μL；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL