β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase, β-GC）試劑盒說明書(shu)

微量法

正式測定前務必取 2-3 個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi) ：

β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在於(yu) 動物、植物、微生物和培養(yang) 細胞中，催化β-糖苷鍵水解， 具有多方麵生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC 負責進一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖；β-GC 水解萜烯類香氣前驅體(ti) ，使糖苷鍵合態變成遊離態。從(cong) 而產(chan) 生香味；

β-GC 能夠水解植物體(ti) 內(nei) 野黑櫻苷，釋放 HCN，從(cong) 而防止昆蟲取食。

測定原理：

β-GC 分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，後者在 400nm 有大吸收峰， 通過測定吸光值升高速率來計算β-GC 活性。

自備用品：

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、台式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配製：

提取液：液體(ti) 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨(lin) 用前每瓶加入 12mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體(ti) 15mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體(ti) 15mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌或培養(yang) 細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個(ge) ）：提取液體(ti) 積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wan) 細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重複 30 次）；15000g

4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱 30min 以上，調節波長至 400nm，蒸餾水調零。

2、加樣表

充分混勻，室溫靜置 2min 後，400nm 處測定吸光值 A，計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個(ge) 測定管需設一個(ge) 對照管。

β-GC 活力計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為(wei) y=0.32x-0.0027；x 為(wei) 標準品濃度（nmol/mL），y 為(wei) 吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每 mg 組織蛋白每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=62.5×(ΔA+0.0027)÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每 g 組織每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.32×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=62.5×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每 1 萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/104cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.125×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.3mL；V 樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.03mL；V 樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，

500 萬(wan) ；T：反應時間，0.5h。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為(wei) y=0.16x-0.0027；x 為(wei) 標準品濃度（nmol/mL），y 為(wei) 吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義(yi) ：每 mg 組織蛋白每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.16×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=125×(ΔA+0.0027)÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義(yi) ：每 g 組織每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.16×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=125×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義(yi) ：每 1 萬(wan) 個(ge) 細菌或細胞每小時產(chan) 生 1nmol 對-硝基苯酚定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

β-GC 活力(nmol/h/104cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.16×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.25×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；V 反總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，0.3mL；V 樣：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.03mL；V 樣總：加入提取液體(ti) 積，1mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，

500 萬(wan) ；T：反應時間，0.5h。