布魯氏菌病抗體(ti) 檢測試劑盒

使用說明書(shu)

【介紹】

布魯氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗體(ti) 檢測試劑盒用於(yu) 檢測牛、羊、豬、犬等動物血清中的布魯氏菌抗體(ti) 。

本試劑盒采用競爭(zheng) ELISA法，在酶標板條微孔上預包被布魯氏菌抗原。在試驗中，加入稀釋液、待檢血清與(yu) 酶結合物，經過溫育後，若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體(ti) ，則與(yu) 酶結合物中的酶標記抗體(ti) 競爭(zheng) 板孔中包被的抗原表位，溫育後將多餘(yu) 的遊離抗體(ti) 通過洗滌去除；在微孔中加入TMB顯色液，經酶催化產(chan) 生的藍色信號與(yu) 樣本中的抗體(ti) 含量成反比，加入終止液終止反應後，用酶標儀(yi) 450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

【組份】

【需自備的設備及試劑】

• 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
• 一次性移液器吸頭。
• 量筒：500ml。
• 96孔板酶標儀。
• 蒸餾水或去離子水。
• 洗瓶或洗板機。

【樣品製備】

取動物全血，按常規方法製備血清，要求血清清亮，無溶血。

【洗滌液的準備】

濃縮洗滌液使用前應恢複至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然後用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【注意事項】

• 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻，使用後放回2-8℃。
• 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑汙染。
• 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。
• TMB（顯色液）不要暴露於強光和避免接觸氧化劑。
• 檢測板拆封後應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加幹燥劑放於自封袋中，並盡快置於2-8℃)。
• 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免汙染。
• 嚴格遵守操作說明可以獲得zui好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須。
• 抗原包被板為一次性用品，不得重複使用； 

【操作步驟】

• 在稀釋板上按1：40稀釋待檢血清樣本以及陰陽性對照品（195µl樣本稀釋液+5µl樣本血清），並吹打均勻
• 取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取20µl加入到檢測板孔內。同時設陰性對照2孔，陽性對照1孔，取陰性及陽性稀釋液各20µl分別加入反應孔中。
• 然後再加酶結合物80µl/孔，加入反應孔中輕微震蕩混勻（勿溢出），蓋上封板膜，置37℃溫育60分鍾。
• 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，後甩去孔內液體，以上步驟重複4-6次，zui後在幹淨吸水紙上拍幹。
• 每孔加顯色液100µl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鍾。
• 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鍾內測定結果。

【結果判定】

用酶標儀(yi) 於(yu) 450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

 陰性對照(N)OD值>0.5，同時陽性對照(P)阻斷率>80%；

計算方法：

PI (阻斷率)= {1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）}×100%

陰陽性判斷：

PI(阻斷率)>70%則判斷為(wei) 陽性；

PI≤70%則判斷為(wei) 陰性。

【有限期】

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存。

有效期： 12個(ge) 月。