冰凍幹燥技術

冰凍幹燥就是使蛋白樣品液在預先冰凍的狀態下，用抽真空的方法，不經液態，直接升華，除去其中所含水分，並使樣品蛋白成為(wei) 幹燥製劑的過程。在免疫酶技術中，所用的血清、酶等在溶液中容易變性腐敗，製成幹燥製劑後可長時間地在室溫或冰箱（4℃）內(nei) 保存而不失活，並且便於(yu) 攜帶。

之所以要在冰凍是因為(wei) 被幹燥樣品所含水分或溶劑由於(yu) 周圍空氣壓力的減少而增加蒸發速度，並且真空度愈高，溶液沸點越低，蒸發越快。

冰凍真空幹燥與(yu) 真空幹燥和噴霧幹燥相比，在實驗中應用得更多更普遍。

• 冰凍幹燥血清的程序

• 先將適量血清傾倒在適當大小的培養皿中（樣品液厚度在1cm以下），在低溫—20℃以下）下冰凍成固態。
• 在冰凍幹燥裝置中，分別放置固體氫氧化鈉和五氧化二磷，真空幹燥器上端抽氣管通過五氧化二磷幹燥管與真空泵相連。
• 將冰凍血清塊連同培養皿放進真空幹燥器內，立即封閉幹燥器（事先在蓋沿塗上凡士林），開動油泵，一般經5－10h後，即可得冰凍幹燥製劑。
• 冰凍幹燥完畢。首先逐漸打開幹燥器頂蓋玻璃閥，慢慢放氣，待整個係統中壓力上升到大氣壓後，取下樣品幹燥容器，zui後關閉真空油泵。

 2.討論

（1）冰凍幹燥的效果，取決(jue) 於(yu) 真空泵的真空度與(yu) 口徑合適的管道。真空油泵選用抽空容量大的，所有接管應力求粗短。

    （2）樣品如果是溶液，則是水溶液，以避免有機溶劑降低冰點，進入泵內(nei) 。濃度要適中，不低於(yu) 1.5%。

1. 樣品如用緩衝液作為溶劑，用有揮發性的，例如碳酸鹽或醋酸鹽緩衝液;若是非揮發性的，則要考慮pH和鹽濃度對樣品的影響。例如用pH7.0磷酸鹽緩衝液，由於冰凍幹燥時Na2鹽比Na鹽先結晶，pH降至約3.5，對樣品有害。在樣品液中加入少量的明膠、乳糖或葡萄糖等，有利於保存活性。
2. 樣品預凍時先放在普通冰箱冷至0℃後，迅速移入一20℃以下的冰箱驟冷凍結。
3. 在抽真空時，樣品萬一融化，必須重新預凍，並要檢查原因。
4. 抽真空約30min，如盛有預凍樣品的容器結霜，表明運轉良好。由於樣品中水分的升華，溫度降低，樣品自然處於冰凍狀態，不必在幹燥器外邊采取冷卻措施。
5. 幹燥製劑裝於小瓶，用蠟封口，貯於普通冰箱。

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