人外周血白細胞分離液實驗方法WBC1077k
（細胞培養(yang) 及分子生物學）
【產(chan) 品規格】
200ml/Kit
【產(chan) 品組成】
為(wei) 方便廣大用戶使用，試劑內(nei) 容如下：
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| 名稱 | 產(chan) 品編號 |
| 規格 |
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| A | 人外周血白細胞分離液 |
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| 200ml |
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| B | 樣本稀釋液（贈品） | 2010C1119 |
| 200ml |
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| C | 清洗液（贈品） |
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| 2010X1118 |
| 200ml |
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| D | 紅細胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 |
| 100ml |
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| E | 說明書(shu) |
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| 1 份 |
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【實驗前準備】 |
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A． 適用儀(yi) 器 |
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| zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機 |
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B． 耗材 |
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| 產(chan) 品名稱 |
| 產(chan) 品貨號 |
| 產(chan) 地 |
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| 15ml 離心管散裝 |
| 339650 |
| 美國 NUNC |
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| 15ml 離心管架裝 |
| 339651 |
| 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管散裝 |
| 339652 |
| 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管架裝 |
| 339653 |
| 美國 NUNC |
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| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
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【檢驗方法】 |
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全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
首先取抗凝血，根據樣本量大小，分以下兩(liang) 種情況：
情況 A：血液樣本量小於(yu) 5ml 時，實驗方法如下：
1. 取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液
2. 用吸管小心吸取血液樣本加於(yu) 分離液液麵上，400-500g，離心 20-30min（注：如改
變血液樣本及分離液用量，需相應調整離心力及離心時間，具體(ti) 離心條件需客戶自行摸
索，以達到分離效果。）
3. 離心後用吸管小心吸取所有環狀乳白色細胞層（一層或兩(liang) 層），加入 10 ml 清洗液（產(chan) 品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重複洗滌 2-3 次，即得所需白細 胞。
4. 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chan) 品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體(ti) 操
作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。
情況 B：血液樣本量大於(yu) 等於(yu) 5ml 時，實驗方法如下：
1. 取一支適當的離心管，先加入與(yu) 樣本等量的分離液。
2. 將血液樣本小心加於(yu) 分離液之液麵上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心 時間越長，具體(ti) 離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果。加入血液樣本後，樣 本及分離液總體(ti) 積不得超過離心管總體(ti) 積的三分之二）。
3. 剩餘(yu) 步驟同“情況 A”中步驟 3 與(yu) 步驟 4。
【注意事項】
1. 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為(wei) 獲得的實驗結果，zui 好在取血 2h 內(nei) 進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 後 分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2. 本實驗不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料製品，應使用無靜電、低靜電離 心管及未經堿處理過後的玻璃製品，因為(wei) 靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表麵 會(hui) 變成毛麵，影響細胞分離效果。
3. 分離液用量大於(yu) 稀釋後血液樣本時，分離效果更佳。
4. 當血液樣本粘度過高需稀釋時，*稀釋方法：將血液與(yu) 樣本稀釋液（產(chan) 品編號： 2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當的稀釋方法會(hui) 降低細胞得率及活性。如血液樣 本經過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
5. 如實驗後細胞得率或活性過低，請以尋求幫助，具體(ti) 詳 見下方生產(chan) 企業(ye) 信息。
【儲(chu) 存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封後置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考範圍）】
本實驗白細胞提取率及純度大於(yu) 80%。
下表為(wei) 成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
| 紅細胞 |
| 白細胞 |
| 血小板 |
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| （4.0-10.0）×109 |
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含量（個(ge) /L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒細胞 | 淋巴細胞 | 單核細胞 | （1.0-3.0）×1011 |
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| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
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【相關(guan) 實驗技術方案】
1. 所獲得白細胞的培養(yang) 技術。
2. 所獲得白細胞的核酸提取技術。
3. 所獲得白細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術 B.bv官网中国官方网站技術 C.原位雜交技術
D.PCR 技術
注：上述技術方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、
純化、擴增、鑒定及生物治療技術手冊(ce) ”，並在說明書(shu) 項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決(jue) 方法】
1. 由於(yu) 血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決(jue) 方案如下表所示：
出現情況 | 出現原因 | 建議解決(jue) 方案 |
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離心後目的細胞存在於(yu) 血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
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離心後目的細胞存在於(yu) 分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 |
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離心後白環層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
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離心後白環層太淺或看不見 | 細胞密度過小 |
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2. 本分離液分離細胞的原理為(wei) 密度梯度離心，其密度與(yu) 溫度、大氣壓等密切相關(guan) 。不同地 區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離 心時間，對離心轉速進行調整。
3. 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與(yu) 國產(chan) 同類產(chan) 品略有不同，可 能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為(wei) 基數，直至達到分離效果，
離心力zui小不得小於(yu) 400g，zui大不得大於(yu) 1200g。離心時間以 20-30min 為(wei) 準。
