磁珠法PCR產(chan) 物純化回收試劑盒說明書(shu)
Magbind PCR Purification Kit
目錄號：YJ2516
運輸條件：室溫（15-25℃）。
保存條件：MBPure 2-8℃保存，其他組分室溫（15-25℃）保存。
組分說明
Size 5 ml 60 ml
MBPure 5 ml 60 ml
Buffer PW 12 ml 3×48 ml
Buffer EB 6 ml 60 ml
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途
上海研謹生物中國生物試劑生產(chan) 商
產(chan) 品簡介
本試劑盒提供了一種簡單、快速、的核酸純化方法。MBPure與(yu) 樣品按一定比
例混合後，磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗後，洗脫得到的DNA純度高，A260/A280 的比值在1.7-1.9之間，A260/A230的比值通常在2.0以上。經該試劑盒純化得到的 DNA適用於(yu) 測序，克隆等下遊實驗。
試劑盒說明
Sample type Typical yield Sample type Typical yield
5000 bp segment Up to 90% 1000 bp segment Up to 90%
500 bp segment Up to 80% 200 bp segment Up to 80%
純化回收得率的計算
我們(men) 建議通過瓊脂糖電泳純化前後的樣品進行回收得率的計算。我們(men) 不建議通過
260 nm處的光吸收值來計算回收得率。因為(wei) 溶液中單鏈、雙鏈DNA和dNTP以及一些純
化前的某些雜質在260 nm處都有光吸收，這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會(hui) 得到
一個(ge) 假的、虛高的DNA濃度值。
實驗前準備及重要注意事項
1．嚴(yan) 禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會(hui) 對磁珠造成不可逆的損害。
2．磁珠長期放置後會(hui) 聚集成團，從(cong) 而使磁珠表麵積減小，降低樣品回收得率，使用前
一定要渦旋振蕩*混勻磁珠（這一過程通常需要渦旋振蕩20秒）。
3．本試劑盒不適用於(yu) 純化回收小於(yu) 100 bp的DNA片段，如果要回收小於(yu) 100 bp的DNA
片段，可將MBPure的用量增加到樣品體(ti) 積的4倍。
自備儀(yi) 器
1．恒溫混勻儀(yi) ——建議使用Eppendorf設計生產(chan) 的Thermomixer。
2．磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。
操作步驟（手動）
1．渦旋振蕩MBPure 20秒，使其*混勻為(wei) 均一溶液。
2．向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產(chan) 物或其他DNA樣本，然後加入2倍樣品體(ti) 積的MBPure。渦旋振蕩混勻後，室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鍾。
注意：如無Thermomixer，可將離心管連續顛倒混勻10分鍾。
3．將上一步的離心管放於(yu) 磁力架上，直至磁珠*吸附（約需1分鍾）。
4．保持離心管固定於(yu) 磁力架上，棄去溶液，期間避免接觸磁珠。
5．向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW後，將離心管從(cong) 磁力架上取下，渦旋振蕩
10秒鍾後將離心管重新放回磁力架。靜置1分鍾，待磁珠*吸附於(yu) 離心管側(ce) 壁後*棄去漂洗液。
6．重複步驟5。
7．保持離心管固定於(yu) 磁力架上靜置放置10分鍾，使乙醇*揮發幹淨。
注意：如果磁珠幹燥過度會(hui) 極大的降低DNA的回收得率。
8．將離心管從(cong) 磁力架上取下，加入20-100 μl Buffer EB，渦旋振蕩將磁珠重懸於(yu) 洗脫液
中後將離心管放於(yu) 65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鍾。
注意：如無Thermomixer，可將離心管放於(yu) 65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鍾渦旋震蕩5秒鍾。
9．將離心管放於(yu) 磁力架上直至磁珠*吸附（約需1分鍾）。
10.將洗脫液轉移至一個(ge) 新的1.5 ml離心管中。此時，可棄去磁珠。
