DH5α感受態細胞說明書(shu)

   DH5α Competent Cell

   目錄號：YJ0808

   保存條件：-80℃保存。

   組分說明

                      Cat. No.                         YJ0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19，0.1    ng/μl      10 μl

   產(chan) 品簡介

    本產(chan) 品是采用大腸杆菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於(yu) DNA

的熱擊轉化。DH5α是一種常用於(yu) 質粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產(chan) 物可與(yu) 載

體(ti) 編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用於(yu) 藍白斑篩選 recA1和endA1的突變

有利於(yu) 克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可

達108，適用於(yu) 的質粒DNA克隆並能保證高拷貝質粒的穩定複製。

本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

注意事項

 1．感受態細胞一定要用幹冰運輸。感受態細胞應在 -80℃下保存，不可反複凍融和放

    置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

    2．轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

 1．取感受態細胞置於(yu) 冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為(wei) 50-100                                  μl，可以根據實際情況分裝使用。

       以下實驗以50μl感受態細胞為(wei) 例。

 2．待感受態細胞融化後，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量

    的DNA，通常100        μl感受態細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鍾。

 3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鍾。

 4．每個(ge) 離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yang) 基（不含抗生素），混勻後置於(yu) 37℃

    搖床，150rpm振蕩培養(yang) 45分鍾使菌體(ti) 複蘇。

 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的                                      SOC或LB固體(ti) 瓊脂培養(yang) 基上，用無菌的塗布棒將細胞均勻塗開，將平板置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收，

    倒置培養(yang) ，37℃培養(yang) 12-16小時。

 注意：1）塗布用量可根據具體(ti) 實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chan) 物塗布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300         μl轉化產(chan) 物塗布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000rpm，2分鍾）後吸除部分培養(yang) 液，懸浮菌體(ti) 後將其塗布於(yu) 平板中。

   2）新製備的固體(ti) 培養(yang) 基不易塗幹，可將平板正置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收後再倒置培養(yang) 。

   3）塗布剩餘(yu) 的菌液可置於(yu) 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再塗布新培養(yang) 基進行培養(yang) 。