BL21(DE3)感受態細胞說明書(shu)

BL21(DE3) Competent Cell

BL21(DE3)感受態細胞

目錄號：YJ0809

保存條件：-80℃保存。

組分說明

                  Cat. No.                          YJ0809A

                  Size                              10×100 μl

                  BL21(DE3) Competent Cell          10×100 μl

                  Control DNA pUC19，0.1 ng/μl         10 μl

產(chan) 品簡介

　　本產(chan) 品是大腸杆菌  BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於(yu)

DNA的熱擊轉化。BL21(DE3)菌株適合表達非毒性蛋白，該菌株是以T7 RNA聚合酶為(wei)

表達係統的外源基因蛋白表達的宿主。T7噬菌體(ti) RNA聚合酶基因的表達受λ噬菌體(ti)

DE3區的lacUV5啟動子調控，該區整合在BL21染色體(ti) 上。使用pUC19質粒檢測，轉化

效率可達107

                本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

                                                        中國生物試劑生產(chan) 商  

    注意事項

    1．感受態細胞一定要用幹冰運輸。感受態細胞應在  -80℃下保存，不可多次凍融和放

       置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

    2．轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態細胞置於(yu) 冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為(wei) 50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。

       以下實驗以50 μl感受態細胞為(wei) 例。

    2．待感受態細胞融化後，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量

       的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕 輕吹打混勻，冰浴30分鍾。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鍾。

    4．每個(ge) 離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yang) 基（不含抗生素），混勻後置於(yu) 37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養(yang) 45分鍾使菌體(ti) 複蘇。

    5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的   SOC或LB固體(ti) 瓊脂培養(yang) 基上，用無菌的塗布棒將細胞均勻塗開，將平板置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收，

倒置培養(yang) ，37℃培養(yang) 12-16小時。

       注意：1）塗布用量可根據具體(ti) 實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產(chan) 物塗布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產(chan) 物塗布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鍾）後吸除部分培養(yang) 液，懸浮菌體(ti) 後將其塗布於(yu) 平板中。

 2）新製備的固體(ti) 培養(yang) 基不易塗幹，可將平板正置於(yu) 37℃直至液體(ti) 被吸收後再倒置培養(yang) 。

       3）塗布剩餘(yu) 的菌液可置於(yu) 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再塗布新培養(yang) 基進行培養(yang) 。