固相載體(ti) 的選擇和試劑的製備

ELISA的主要試劑為(wei) 固相的抗原或抗體(ti) ，酶標記的抗原或抗體(ti) 和與(yu) 標記酶直接關(guan) 聯的酶的反應底物。

1.固相載體(ti) 的選擇

ELISA可用許多不同類型的固相如纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯葡萄糖、玻璃、矽橡膠、瓊脂糖凝膠和含Fe2O3的磁性聚苯乙烯等材料，這些材料一共價(jia) 鍵與(yu) 抗原或抗體(ti) 結合，但有其缺點，除含鐵的顆粒外，其他材料ELISA衝(chong) 洗步驟中都要離心。如果固相用微量板或微量管，大顆粒或透明小燒杯就不需要離心，這些固相都是用聚苯乙烯、聚乙烯和尼龍材料製成的。固相可以預先用r射線或紫外光處理也可以不處理。幾乎所有的塑料都有吸附蛋白質的能力，一般認為(wei) 聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體(ti) 或蛋白質抗原吸附其上後保留原來的免疫活性。另外聚苯乙烯在ELISA測定過程中作為(wei) 載體(ti) 和容器，不參與(yu) 化學反應，加之他的價(jia) 格低廉，可製成各種形狀，故被普遍采用。聚乙烯的吸附能力雖好，但因材料本身質軟使操作不便，聚丙烯的吸附性能差，故聚乙烯和聚丙烯的使用都很少。聚苯乙烯經過射線照射後對蛋白質，特別是免疫球蛋白吸附性能增加，應用於(yu) ELISA雙抗體(ti) 夾心法可使固相上抗體(ti) 量增多，但用於(yu) 間接法測抗體(ti) 時空白值較大。

為(wei) 比較不同固相在某一ELISA測定中的優(you) 勢可將陽性和陰性參考血清分別稀釋後在不同的固相載體(ti) 上按選擇的ELISA操作步驟進行，顯色後比較每孔溶液的吸光值。在哪種載體(ti) 上的陽性和陰性參考血清的反應差別zui大，表明哪種固相zui為(wei) 合適。

ELISA載體(ti) 的形狀隻要有三種：小試管、小珠和微量酶標板。小試管的特點是可用作反應的容器，zui後放入分光光度計中比色。小珠一般為(wei) 直徑0.6cm的圓球，表麵磨砂後吸附麵積大大增加，如用特殊的洗滌器，在洗滌的過程中使圓珠滾動淋洗，效果更好。zui常用的載體(ti) 為(wei) 微量酶標板，於(yu) ELISA的產(chan) 品稱為(wei) ELISA板。上標準的微量酶標板是96孔微量板。

ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，並可在酶標儀(yi) 上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀(yi) 器用於(yu) 微量酶標板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、孵育、比色等步驟，對操作的標準化極為(wei) 有利。

由於(yu) 酶標板在各個(ge) 方麵存在一些差異，因此選擇的酶標板不僅(jin) 需要於(yu) ELISA的酶標板，而且還要考慮板的吸附能力和各孔的均質性。良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由於(yu) 材料的不同和製作工藝的差別，各種商品酶標板質量差異很大。