大鼠膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)試劑盒說明書(shu)

本試劑僅(jin) 供研究使用       目的：本試劑盒用於(yu) 測定大鼠血清，血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)的含量。

GDNF實驗原理：

  本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)水平。用純化的膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)，再與(yu) HRP標記的GDNF抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠膠質細胞係來源的神經營養(yang) 因子(GDNF)濃度。

GDNF試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。

6. 標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然後在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為60ng/L， 40ng/L ，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。

注意事項：

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5. 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。

計算：

以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，   

在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋     

倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標     

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值     

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋     

倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

GDNF試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R值為(wei) 0.990以上。

2.批內(nei) 與(yu) 批見應分別小於(yu) 9%和11%

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(ge) 月

人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)ELISA 試劑盒
人假定蛋白LOC677168 ELISA 試劑盒
人淋巴細胞抗原6複合物基因座A(Ly6a)ELISA 試劑盒
人嗜酸性白血球相關(guan) 之RNA水解酵素家族成員1(EAR1)ELISA 試劑盒
人混合係列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA 試劑盒
人過氧化物酶體(ti) 增殖激活物受體(ti) γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA 試劑盒
人類似cDNA順序BC027382 ELISA 試劑盒
人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 ELISA 試劑盒
人REST協阻抑因子3(RCOR3)ELISA 試劑盒
人集蛋白亞(ya) 家族成員11(COLEC11)ELISA 試劑盒
人α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA 試劑盒
人可溶性髓係細胞觸發受體(ti) -1(sTREM-1)ELISA 試劑盒
人肌抑素(MSTN)ELISA 試劑盒