WB實驗注意細節

1. 細胞樣本，收細胞時， PBS預冷。

2. 組織樣本在取材時離體(ti) 組織應盡快凍存，可以置於(yu) 液氮中迅速冷凍，使用組織勻漿機進行勻漿時， 一次研磨時間不宜過長， 40s左右即可，如研磨不充分，可再次研磨。

3. PMSF應注意搖勻至無結晶時方可使用。

4. 冰上裂解時，可以晃動以使裂解充分。

5. 裂解後的樣本盡量分裝保存，避免反複凍融，盡快變性使用。

6. BCA定量時盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由於(yu) 有些儀(yi) 器邊緣效應）。

7. 樣本可以根據具體(ti) 情況稀釋合適的倍數再進行定量，以免超出標曲範圍。

8. BCA定量時，可以使用儀(yi) 器中速輕微震蕩3-10秒，混勻96孔板內(nei) 液體(ti) ，再進行測量。

9. 變性時，注意加熱後小心管蓋爆開。

10. 配膠時，板子一定徹底清洗幹淨。

11. 配膠的各組分注意充分混勻。

12. 點樣時，多餘(yu) 的孔可以用loading buffer補齊。

13. 轉膜時， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜，以防汙染。

14. 轉膜不可放反，牢記黑膠白膜，注意電極正負極。

15. 封閉時， BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗體(ti) 種屬要注意區分。

17. 洗膜要充分。

18. 顯影液應滴加均勻。

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