細胞培養關鍵事項

1.如何選用培養(yang) 基？
培養(yang) 某一類型細胞沒有固定的培養(yang) 條件。在MEM中培養(yang) 的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，選MEM做粘附細胞培養(yang) 、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yang) ，各種目的無血清培養(yang) 的選是AIM V培養(yang) 基（SFM）。在開始進行新的細胞培養(yang) 時，可以參考下表所列的條件：

2.為(wei) 什麽(me) 要熱滅活血清？
加熱可以滅活補體(ti) 係統。激活的補體(ti) 參與(yu) 溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養(yang) ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

3.L－穀氨酰胺在細胞培養(yang) 中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－穀氨酰胺在細胞培養(yang) 時是重要的。脫掉氨基後，L－穀氨酰胺可作為(wei) 培養(yang) 細胞的能量來源、參與(yu) 蛋白質的合成和核酸代謝。L－穀氨酰胺在溶液中經過一段時間後會(hui) 降解，但是確切的降解率一直沒有最終確定。L－穀氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對於(yu) 一些細胞具有毒性。

4.GlutaMAX-I是什麽(me) ？培養(yang) 細胞如何利用GlutaMAX-I？這個(ge) 二肽有多穩定？
GlutaMAX-I二肽是L－穀氨酰胺的衍生物，將其不穩定的α－氨基用L－丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L－穀氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鍾，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L－穀氨酰胺幾乎完全降解。

5.為(wei) 什麽(me) 培養(yang) 基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養(yang) 基中被用來作為(wei) PH值的指示劑：中性時為(wei) 紅色，酸性時為(wei) 黃色，堿性時為(wei) 紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為(wei) 避免固醇類反應，培養(yang) 細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yang) 基。由於(yu) 酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yang) 基。

6.如何用台盼蘭(lan) 計數活細胞？
用無血清培養(yang) 基把細胞懸液稀釋到200－2000個(ge) /毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼蘭(lan) 溶液。輕輕混勻，數分鍾後，用血球計數板計數細胞。活細胞排斥台盼蘭(lan) ，因而染成藍色的細胞是死細胞。

7.如何消除組織培養(yang) 的汙染？
當重要的培養(yang) 汙染時，研究者可能試圖消除或控製汙染。首先，確定汙染物是細菌、真菌、支原體(ti) 或酵母，把汙染細胞與(yu) 其它細胞係隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yang) 器皿和超淨台，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞係有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素產(chan) 生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩(liang) 性黴素B和抗黴菌素如泰樂(le) 菌素時尤其重要。