WB常見問題及對策（條帶缺失、信號弱）等

一、不好看的條帶

1.不好看的條帶大多是因為(wei) 蛋白酶降解，造成條帶出現在奇怪的位置。建議使用已經保存在冰上的新鮮樣品或換抗體(ti) 。

2.如果蛋白質位置比較高，重新加熱樣本可以幫助打破蛋白質的結構。

3.模糊的條帶經常是因為(wei) 轉染過程中電壓過高或氣泡，應確保凝膠在較低的電壓下運行，以及轉染的三明治避免產(chan) 生氣泡。另外，換新的電泳緩衝(chong) 液可能也可以幫助解決(jue) 問題。

4.條帶不平滑，可能是由於(yu) 阻力低導致穿過蛋白質凝膠的速度過快，因此要選用質量較好的樣品。

5.白色條帶是由於(yu) 蛋白質或抗體(ti) 太多了。

二、條帶缺失

1.一抗或二抗有問題。

2.抗體(ti) 濃度太低。

3.有些抗體(ti) 不能用於(yu) WB。

4.轉膜液、TBST、電泳緩衝(chong) 液或ECL比較陳舊或有質量問題。

5.抗體(ti) 中加入了疊氮化NA， 幹擾ECL發光。

三、 目的蛋白信號弱

1.條帶信號弱可能是抗體(ti) 或抗原濃度低造成的，可以嚐試增加曝光時間。

2.另一個(ge) 原因可能是脫脂奶粉掩蓋了抗原。在這種情況下使用BSA 或減少使用的牛奶量。

四、背景過高

1.高背景通常是由於(yu) 與(yu) PVDF膜結合的抗體(ti) 濃度過高造成的。

2.另一個(ge) 可能是緩衝(chong) 液太舊。可以試試多洗一會(hui) 。

3.曝光也可能導致背景過高。建議試試不同的曝光時間來找到最佳時間。

五、條帶上的斑點

1.條帶上出現斑點可能是轉膜的問題。如果有氣泡出現在凝膠和膜之間，會(hui) 在條帶上顯示很暗的影，因此趕氣泡是很重要的。

2.洗背景是至關(guan) 重要的。

3.可能是由於(yu) 二抗的聚合，在這種情況下，二抗可以離心並過濾以去除聚合體(ti) 。

從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗技術及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!

如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。

實驗技術服務：