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間充質幹細胞成脂誘導分化試劑盒
點擊次數:233 更新時間:2025-02-08

間充質幹細胞成脂誘導分化試劑盒

,成脂誘導液

貨號:YJ-MSCYD-004

價(jia) 格: 1280.0

規格: 100ml    200ml

產(chan) 品描述

本產(chan) 品為(wei) 團隊精心優(you) 化的間充質幹細胞成脂誘導分化試劑盒,可增強間充質幹細胞向成脂細胞分化的能力。

本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研用途,不可用於(yu) 診斷、治療、臨(lin) 床、家庭及其他用途。

產(chan) 品組成成分及保存

試劑名稱

體(ti) 積(100mL規格/200mL規格)

保存條件及有效期

誘導分化添加劑

5mL / 10mL

-20℃1 Year

誘導分化添加劑

0.1mL / 0.2mL

-20℃1 Year

優(you) 質胎牛血清

10mL / 20mL

-20℃1 Year

細胞基礎培養(yang) 基

85mL / 170mL

4℃1 Year

油紅O染色液

5mL / 10mL

4避光1 Year

注意

1.為(wei) 保證產(chan) 品的有效性,請避免反複凍融。

2.配製好的誘導培養(yang) 基保存於(yu) 2-8℃,有效期為(wei) 2周,請根據實驗用量合理配製。

產(chan) 品使用說明

1. 成脂誘導分化完全培養(yang) 基的配製

室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化後,瞬時離心,使溶液集中於(yu) 離心管底部。(注意:若因子或血清中有沉澱物,屬正常現象,無須過濾,避免成分丟(diu) 失。)

根據實驗用量,於(yu) 無菌操作台中配製誘導分化完全培養(yang) 基,建議每次配製50mL,配製比例見下表:

試劑成分

配製比例

50mL配製體(ti) 係

誘導分化添加劑

5%

2.5mL

誘導分化添加劑

0.1%

50uL

優(you) 質胎牛血清

10%

5mL

細胞基礎培養(yang) 基

85%

42.5mL

2. 成脂誘導分化實驗步驟

建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質幹細胞,將其消化下來,離心收集,使用含10%FBS的完全培養(yang) 基調整細胞密度,均勻鋪於(yu) 培養(yang) 瓶/板中,置於(yu) 37℃5%CO2,飽和濕度的培養(yang) 箱中培養(yang) 。(細胞接種詳情參考表二

培養(yang) 器皿

底麵積

細胞量

培養(yang) 液體(ti) 積

24孔培養(yang) 板

2cm/

2×105cell/

1mL/

12孔培養(yang) 板

4.5cm/

4.5×105cell/

2mL/

6孔培養(yang) 板

9.6cm/

9.6×105cell/

2mL/

T25培養(yang) 瓶

25cm

25×105cell

5mL

6cm培養(yang) 皿

21cm

21×105cell

5mL

10cm培養(yang) 皿

55cm

55×105cell

10mL

表二

待細胞匯合度達80%~100%時,即可進行誘導分化。

小心吸棄細胞培養(yang) 上清,沿孔壁緩慢加入提前配製好的誘導分化完全培養(yang) 基,置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。(注意:完全培養(yang) 基加入細胞前需提前置於(yu) 37℃預熱。

2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yang) 基。換液時,若細胞培養(yang) 上清顏色變為(wei) 澄清的黃色,是由於(yu) 細胞量較大,培養(yang) 基消耗較快導致的,請及時縮短換液周期。(注意:完全培養(yang) 基加入前需提前置於(yu) 37℃預熱。

細胞誘導3周後,即可進行油紅O染色鑒定。

3. 油紅染色分析

細胞誘導分化結束後,小心吸棄細胞培養(yang) 上清,1×PBS潤洗1~2次。加入適量細胞固定液,室溫固定30 min。(細胞固定液為(wei) 4%中性甲醛溶液等,體(ti) 積參考表二

配製油紅O工作液:油紅O貯存液與(yu) 蒸餾水按照32配製,(例:油紅O貯存液3mL,蒸餾水2mL),混勻。使用濾紙過濾,收集濾液,即為(wei) 油紅O工作液。(注意:成脂細胞內(nei) 的油滴極易脫落,操作時須謹慎。

細胞固定完成後,吸棄細胞固定液,1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入適量油紅O工作液,室溫染色30min。(注意:油紅O工作液底部可能會(hui) 有沉澱,吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色後有沉澱,PBS洗去即可。)

吸出染色液,PBS潤洗,去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果。細胞內(nei) 油滴著色,呈紅色。(注意:油紅O工作液不可重複使用,不建議回收。

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