間充質幹細胞成軟骨誘導分化試劑盒

,成軟骨誘導液

貨號：YJ-MSCYD-003

價(jia) 格： 1980.0

規格： 100ml    200ml

產(chan) 品描述

本產(chan) 品為(wei) 團隊精心優(you) 化的間充質幹細胞成軟骨誘導分化試劑盒，可增強間充質幹細胞向成軟骨細胞分化的能力。

本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研用途，不可用於(yu) 診斷、治療、臨(lin) 床、家庭及其他用途。

產(chan) 品組成成分及保存

Ø 注意：1.為(wei) 保證產(chan) 品的有效性，請避免反複凍融。

2. 誘導分化添加劑Ⅱ須現用現配，加入培養(yang) 基後，須在12小時內(nei) 用完，否則可能影響實驗效果。

3. 配製好的誘導分化預混液（不含誘導分化添加劑Ⅱ）保存於(yu) 2-8℃，有效期為(wei) 2周。

產(chan) 品使用說明（2D/3D培養(yang) ）

1. 成軟骨誘導分化培養(yang) 基的配製

①室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉澱物，屬正常現象，無須過濾，避免成分丟(diu) 失。）

②配製誘導分化預混液：以下簡稱預混液。根據實驗用量，於(yu) 無菌操作台中配製。建議每次配製50mL，先加細胞基礎培養(yang) 基和胎牛血清，再加誘導分化添加劑。（配製比例見表一）

③配製誘導分化完全培養(yang) 基：根據實驗用量，按照1%的比例向預混液中添加誘導分化添加劑Ⅱ，如每1mL預混液添加10uL誘導分化添加劑Ⅱ。（注意：誘導分化添加劑Ⅱ須現用現加，配製完成的誘導分化完全培養(yang) 基12h內(nei) 使用完，否則將失效。）

2. 2D成軟骨誘導分化實驗步驟

①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質幹細胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的培養(yang) 基調整細胞密度，均勻鋪於(yu) 培養(yang) 瓶/板中。將接種好的細胞置於(yu) 37℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yang) 箱中培養(yang) 。（細胞接種詳情參考表二）

                                                                           表二

②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。

③小心吸棄細胞培養(yang) 上清，沿孔壁緩慢加入提前配製好的誘導分化完全培養(yang) 基，置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。（注意：完全培養(yang) 基加入細胞前需提前置於(yu) 37℃預熱。）

④每2day~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yang) 基。換液時，若細胞培養(yang) 上清顏色變為(wei) 澄清的黃色，是由於(yu) 細胞量較大，培養(yang) 基消耗較快導致的，請及時調整為(wei) 每日換液。（注意：完全培養(yang) 基加入前需提前置於(yu) 37℃預熱。）

⑤細胞誘導3周後，即可進行甲苯胺藍染色鑒定。

3. 2D成軟骨細胞甲苯胺藍染色分析

①細胞誘導分化結束後，小心吸棄細胞培養(yang) 上清，1×PBS潤洗1~2次，室溫固定30 min。（細胞固定液為(wei) 4%中性甲醛溶液等，體(ti) 積參考表二）

②吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍染色液，染液體(ti) 積請參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會(hui) 有沉澱，吸取時盡量不要觸及底部。若染色後有沉澱，1×PBS洗去即可。）

③吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，背景呈淡藍色，成軟骨細胞呈紫紅色。（注意：染色液可重複使用，建議收集。）

4. 3D成軟骨誘導分化實驗步驟

①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質幹細胞，將其消化下來，計數。調整細胞濃度，按照每管3~4×105cell將細胞轉移至15mL離心管中，20℃，250×g離心4min。

②棄上清，每管加入0.5mL預混液，重懸細胞沉澱。20℃，150×g離心5min。

③棄上清，每管加入0.5mL成軟骨誘導分化完全培養(yang) 基重懸細胞沉澱，20℃，150×g離心5min。

④將離心管樹立放置於(yu) 37℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yang) 箱中培養(yang) ，擰鬆離心管蓋以便於(yu) 氣體(ti) 交換。（注意：此步驟無需重懸細胞，且24h內(nei) 不可晃動離心管。）

⑤約24h~48h後，細胞出現聚團現象，輕彈離心管底部使軟骨球脫離管底懸浮於(yu) 培養(yang) 液中。

⑥每2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yang) 基，持續誘導三周後，即可將培養(yang) 液更換為(wei) 固定液（4%中性甲醛），將軟骨球固定，後續進行切片染色鑒定實驗。

質量控製

無菌檢測（細菌、真菌和支原體(ti) 檢測）

pH測試

滲透壓檢測

內(nei) 毒素

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注意事項

僅(jin) 限科研用。
培養(yang) 體(ti) 係中的一些組分是對人體(ti) 健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yang) 體(ti) 係的液體(ti) 和有培養(yang) 體(ti) 係的液體(ti) 殘留的容器內(nei) 部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水衝(chong) 洗即可

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