Neuro-2a+luc小鼠腦神經瘤細胞熒光素酶標記

,Neuro-2a luc

貨號：YJ-0083a

價(jia) 格： 3200.0

規格： 1*125ml

細胞介紹

克隆Neuro-2A是由R.J.Klebe和F.H.Ruddle經A株白鼠的自生腫瘤建立。該細胞產(chan) 生大量微管蛋白，此蛋白在神經細胞中起應答軸漿流動的收縮係統作用。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來源：腦神經母細胞瘤

2） 形態：阿米巴樣幹細胞

3） 含量：>1x10⁶  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞篩選

該細胞為(wei) 穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳(chuan) 代次數的增加，其Luc熒光強度會(hui) 逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤黴素進行再次篩選。        

建議收到細胞後至少傳(chuan) 3代，凍存留種後再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為(wei) 1ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基維持培養(yang) ，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為(wei) 含2ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為(wei) 5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大於(yu) 60%，則停止篩選，換成正常培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤黴素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤黴素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yang) 基正常培養(yang) 。

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦YJ-0012）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的複蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。Neuro-2a+luc小鼠腦神經瘤細胞熒光素酶標記

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。 

3.輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗技術及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!

如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。

實驗技術服務：