RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

,RAW264.7 GFP

貨號：YJ-0082a

價(jia) 格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表麵抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅並吞噬乳膠顆粒與(yu) 酵母聚糖。可以抗體(ti) 依賴性地分解綿羊紅血球與(yu) 腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 形態：不規則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞篩選

該細胞為(wei) 穩定轉染GFP的細胞，隨細胞傳(chuan) 代次數的增加，其GFP熒光強度會(hui) 逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤黴素進行再次篩選。

建議收到細胞後至少傳(chuan) 3代，凍存留種後再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為(wei) 1ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基維持培養(yang) ，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為(wei) 含2ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為(wei) 5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大於(yu) 60%，則停止篩選，換成正常培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤黴素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤黴素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yang) 基正常培養(yang) 。

細胞接收後的處理

1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心後用完全培養(yang) 基重懸後打回到原培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) ，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳(chuan) 代，傳(chuan) 代時需要收集培養(yang) 基中懸浮的細胞離心後回收。

4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備

1） 準備DMEM(包含2mM L-穀氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清10 %；P/S青黴素-鏈黴素 1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長並呈現出長方體(ti) 的形態和有“偽(wei) 足"延伸。隨著培養(yang) 時間的增加，細胞呈現圓形並以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會(hui) 有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yang) 基中，鏡下觀察會(hui) 發現懸浮和貼壁的細胞會(hui) 同時出現。

（b）該細胞傳(chuan) 代時不需要用胰酶消化。傳(chuan) 代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yang) 表麵將細胞刮落，收集離心後重懸接種到新的培養(yang) 瓶中。（c）該細胞形態上包含鬆散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會(hui) 輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳(chuan) 代時應收集起來，離心後細胞沉澱可以繼續培養(yang) 。

（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。

3） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的複蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

該細胞為(wei) 懸浮和輕微的貼壁細胞，傳(chuan) 代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yang) 表麵將細胞刮落，收集細胞後離心去上清，重懸後接種到新的裝有新鮮培養(yang) 液的培養(yang) 瓶內(nei) 。收貨後第一次傳(chuan) 代1:2進行，後續可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳(chuan) 代。

3） 細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

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