U251MG/TMZ+luc人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞
Human astroglioma resistant temozolomide cells ,U251 MG/TMZ+luc
貨號：YJ-h244（STR（U251MG鑒定））
價(jia) 格： 3200.0
規格： 1*10 6
細胞介紹
該細胞由U251MG/TMZ細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。
細胞特性
1）來源：U251MG/TMZ | 2）形態：上皮細胞樣，貼壁生長 |
3）含量：>1*10 6細胞數 | 4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5）用途：僅(jin) 供科研使用。 |
細胞運輸、保存及注意事項
複蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養(yang) 瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 幹冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁，置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱 | -80℃冰箱中保存過夜後轉入液氮/立即複蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細胞後，若發現培養(yang) 瓶破損、漏液及細胞有汙染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照並聯係我們(men) 。照片包括細胞培養(yang) 瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）； 2. 若收到的複蘇細胞有少量細胞脫落、飄起，可能由於(yu) 運輸途中導致。請先於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中靜置2~3h後，再進行處理； 3. 複蘇細胞的充液培養(yang) 基為(wei) 不含藥物的維持培養(yang) 基，血清濃度較低，收到細胞後請及時更換為(wei) 完全培養(yang) 基； 4. 建議收到細胞後，首先進行擴增（至少3代），並凍存部分細胞以備用。 5. 細胞傳(chuan) 代或凍存過程中，不可使用含有藥物的培養(yang) 基。 | |
細胞培養(yang) 試劑的配製
1）TMZ藥物的配製及保存
建議將TMZ藥物配製成16mg/mL的母液：即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ藥物，使其完全溶解。（若所購買(mai) 的TMZ藥物規格為(wei) 10mg，則加入625uL DMSO溶液，待其完全溶解即為(wei) 16mg/mL母液）
注意：可根據用量配置藥物，並將藥物分裝保存，避免反複凍融導致藥物失效。溶解後的TMZ，4℃保存1周，-20℃保存1個(ge) 月，-80℃保存6個(ge) 月。
2）凍存液的配製
90%優(you) 質胎牛血清+10%DMSO，現用現配。
3）完全培養(yang) 基的配製（推薦使用YJ-h244-001b）
成分 | 體(ti) 積/濃度 |
優(you) 質胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
16ug/mL TMZ | 0.1%母液（16mg/mL） |
DMEM培養(yang) 基 | 補充至所需體(ti) 積 |
細胞培養(yang) 條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%； 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%~80%。
細胞處理
1）凍存細胞的複蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yang) 基重懸細胞後，均勻鋪於(yu) 含6~8mL完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中，置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況，2~3day換液。
注意：①細胞複蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yang) 基。須在細胞完全貼壁，形態完全展開，生長狀態穩定後，方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥後細胞生長狀態較為(wei) 緩慢，可適當降低TMZ的濃度，或使用不含TMZ的完全培養(yang) 基培養(yang) 至細胞生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的TMZ濃度；
②建議複蘇細胞時始終穿戴防護手套和麵罩，避免凍存管因溫差較大而發生爆炸，造成人員傷(shang) 害。
2）細胞傳(chuan) 代（建議以同等底麵積的培養(yang) 瓶/皿按照1：2比例傳(chuan) 代）
①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
②棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸淨殘餘(yu) 的PBS。
③加入適當體(ti) 積的0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶-1mL，其它培養(yang) 器皿可覆蓋培養(yang) 底麵即可），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓並脫落，即可輕拍培養(yang) 瓶使細胞全部脫落。迅速拿回操作台，加入2倍體(ti) 積的、含10%FBS的培養(yang) 基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細胞沉澱中加入1~2mL完全培養(yang) 基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪於(yu) 2個(ge) 新的培養(yang) 瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yang) 基，置於(yu) 37℃恒溫細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況，2~3day換液。
注意：細胞傳(chuan) 代過程中，不可使用含有藥物的培養(yang) 基。須在細胞完全貼壁，形態完全展開，生長狀態穩定後，方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥後細胞生長狀態較為(wei) 緩慢，可適當降低TMZ的濃度，或使用不含TMZ的完全培養(yang) 基培養(yang) 至細胞生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的TMZ濃度。
3）細胞凍存
①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳(chuan) 代的①~④，細胞計數後，加入配製好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×106 ~ 1×107個(ge) 細胞/mL分配到一個(ge) 凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
②將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。
細胞篩選
穩定轉染luc的細胞，隨細胞傳(chuan) 代次數的增加，其luc熒光強度逐漸減弱。若要維持熒光強度，需加入嘌呤黴素進行篩選。
初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為(wei) 1ug/mL嘌呤黴素的完全培養(yang) 基維持培養(yang) ，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為(wei) 含2ug/mL嘌呤黴素的完全培養(yang) 基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為(wei) 5ug/mL。若篩選過程中，漂浮細胞大於(yu) 60%，則停止篩選，換成正常培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤黴素進行篩選。當加入5ug/mL嘌呤黴素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yang) 基正常培養(yang) 。
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