HELA+luc人宮頸癌細胞 熒光素酶標記

HELA+luc HELA luciferase labeling of human cervical cancer cells ,HELA luc

貨號：YJ-0056a（STR（hela鑒定））

價(jia) 格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞介紹

角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 有報告稱MS751細胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據報道，p53表達水平低，pRB(成視網膜細胞瘤抑製因子)表達水平正常。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來源：宮頸腺癌

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞篩選

該細胞為(wei) 穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳(chuan) 代次數的增加，其Luc熒光強度會(hui) 逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤黴素進行再次篩選。        

建議收到細胞後至少傳(chuan) 3代，凍存留種後再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為(wei) 1ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基維持培養(yang) ，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為(wei) 含2ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為(wei) 5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大於(yu) 60%，則停止篩選，換成正常培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤黴素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤黴素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yang) 基正常培養(yang) 。

運輸和保存

可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式

（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；

（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

（3）收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞接收後的處理

1） 收到細胞後，請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中（或新的培養(yang) 瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基）。

6）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代 。

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦YJ-0012）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4 . 收到細胞後首次傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中，建議客戶凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。

細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

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