A549+RFP人肺癌細胞+RFP

Human lung cancer cells ,A549 RFP

貨號：YJ-0018a（STR（A549鑒定））

價(jia) 格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞介紹

該細胞係由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yang) 建係，患者為(wei) 58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶RFP基因。

細胞特性

1） 來源：肺癌

2） 形態：上皮細胞樣，多角形；貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞篩選

該細胞為(wei) 穩定轉染RFP的細胞，隨細胞傳(chuan) 代次數的增加，其RFP熒光強度會(hui) 逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤黴素進行再次篩選。

建議收到細胞後至少傳(chuan) 3代，凍存留種後再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為(wei) 1ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基維持培養(yang) ，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為(wei) 含2ug/ml嘌呤黴素的完全培養(yang) 基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為(wei) 5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大於(yu) 60%，則停止篩選，換成正常培養(yang) 基培養(yang) ，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤黴素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤黴素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yang) 基正常培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

3.輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

下麵T25瓶為(wei) 例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×10⁶~1×10⁷個(ge) 活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。

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