豬細小病毒抗體(ti) （IgG）診斷試劑盒（酶聯免疫法）說明書(shu)
【產(chan) 品名稱】
通用名稱：豬細小病毒抗體(ti) ( IgG) 診斷試劑盒（酶聯免疫法）
英文名稱：Porcine Parvovirus Antibody Test Kit (ELISA), PPV Ab
【規格】
96 T×2/盒
【預期用途】
本試劑盒用於(yu) 定性測定豬血清中細小病毒IgG抗體(ti) 。用於(yu) 評估豬場豬細小病毒疫苗免疫狀況以及感染豬的血清學診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗 ( ELISA )原理，由包被有高純度的豬細小抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的PPV-IgG結合，再與(yu) 酶標抗豬IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+PPV-IgG+酶標抗豬IgG抗體(ti) "複合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) PPV-IgG的量成正比，當顯色超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
1 | PPV抗原包被板 | 96 T×2 | |
2 | 酶標記物 | 22 ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50 ml | 透明帽 |
4 | PPV-IgG陰性對照血清 | 1.5 ml | 綠色帽 |
5 | PPV-IgG陽性對照血清 | 1.5 ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12 ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12 ml | 藍色帽 |
8 | 10×濃縮洗滌液 | 50 ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | |
10 | 說明書(shu) | 1份 | |
【自備器材】
1．酶標儀(yi) （ 450 nm /630 nm濾光片）
2．微量移液器（單道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．一次性槍頭（10 μl、200 μl）
6．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為(wei) 豬血清，樣本應無菌采集，2 ℃－8 ℃貯存應不超過一周， 長期應在－20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌的血清樣本。
【實驗準備】
1．試劑盒組分回溫平衡: 試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30 min。酶標板應在室溫中平衡至潮氣幹盡後方可拆開。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋 （例：將5 μl樣本加至195 μl樣本稀釋液中）。
3．配製洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋10倍（例：將10 ml洗滌液加入90 ml去離子水中）。若10倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37 ℃至溶解後即可。
【檢驗方法】
1. 加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100 μl於(yu) 相應孔中（可不設空白對照）。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔，每孔加100 μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本。
2. 溫育：加樣後，蓋上蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
3. 洗板：甩去孔內(nei) 液體(ti) ，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10 s，直接甩出，洗滌3次，最後一次洗滌後吸幹板內(nei) 液體(ti) 。
4. 加酶：每孔加酶標記物100 μl。
5. 溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
6. 洗板：同步驟3。
7. 顯色：每孔加顯色劑100 μl，振蕩混勻，37℃避光反應10 min。
8. 終止：每孔加終止液50 μl，振蕩10 s，充分混勻，終止後即讀數。
9. 讀數：以450 nm/ 630 nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結果判定】
在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.60，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.10；樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否，或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定，S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值－NCx)/(PCx－NCx)，其中NCx表示陰性對照孔平均OD450/630值 （若小於(yu) 0.05，則按照0.05計算），PCx表示陽性對照孔平均OD450/630值；
當樣本的S/P≥0.20時判為(wei) 陽性；樣品S/P值＜0.20時判為(wei) 陰性。
【注意事項】
1. 請在使用試劑盒之前，仔細閱讀說明書(shu) 。
2. 請不要使用過期的試劑盒組分，不要將不同批次的組分混合使用。
3. 本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待，試驗廢棄物應經121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30 min後廢棄。
4. 未用完的微孔板須放回有幹燥劑的鋁箔袋並密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋，與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2 ℃-8 ℃避光保存。
5. 應用微量移液器加入樣本及試劑，並經常校對其準確性。
6. 加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。
7. 終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。
【儲(chu) 存條件及有效期】
於(yu) 2 ℃－8 ℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(ge) 月。
【生產(chan) 日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
僅(jin) 供獸(shou) 醫診斷使用
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