規格:100管/48樣
土壤澱粉酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說明書(shu)
微量法
注意:正式測定之前選擇2-3 個(ge) 預期差異大的樣本做預測定。
產(chan) 品內(nei) 容:
試劑一:液體(ti) 8mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體(ti) 3mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體(ti) 10mL×1瓶,4℃保存。
產(chan) 品說明:
澱粉酶(EC3.2.1.1)是催化澱粉水解的一類酶的總稱。土壤中的澱粉酶主要來自於(yu) 微生物,是一種重要的酶製劑,廣泛應用於(yu) 糧食加工、食品、釀造、發酵、紡織品工業(ye) 和醫藥行業(ye) 。
澱粉酶水解澱粉產(chan) 生還原糖,可與(yu) 3,5-二硝基水楊酸反應生成紅棕色物質,在508nm處有特征吸收峰,顏色深淺在一定範圍內(nei) 與(yu) 還原糖量成正比。
需自備的儀(yi) 器和用品:
天平、水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀(yi) 、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
測定操作表:
對照管 | 測定管 | |
土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
甲苯(μL) | 10 | 10 |
25℃靜置15min | ||
試劑一(μL) | 110 | 50 |
試劑二(μL) | 60 | |
充分混勻,37℃震蕩培養(yang) 1h,8000rpm,25℃,離心10min | ||
上清液(μL) | 100 | 100 |
試劑三(μL) | 100 | 100 |
充分混勻,90℃水浴5min,待冷卻後,於(yu) 微量石英比色皿/96孔板中測定508nm吸光值,分別記為(wei) A對照管和A測定管,△A=A測定管-A對照管。 |
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917
酶活單位定義(yi) :每g土樣每天催化生成1mg還原糖為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。
S-AL(mg/d /g)=(△A +0.034)÷ 0.2525×V反總÷W÷T
= 10.464×(△A +0.034)÷W
V反總:反應體(ti) 係總體(ti) 積,0.11mL;T:反應時間,1/24d;W:樣本質量,g。
b. 用96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917
酶活單位定義(yi) :每g土樣每天催化生成1mg還原糖為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。
S-AL(mg/d/g)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V反總÷W÷T
=20.928×(△A +0.034)÷W
V反總:反應體(ti) 係總體(ti) 積,0.11mL;T:反應時間,1/24d; W:樣本質量,g。
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