MM.1S 人多發性骨髓瘤細胞
MM.1S human multiple myeloma cells ,MM.1S
貨號：YJ-h291（STR鑒定）
價(jia) 格： 1800.0
規格： 1*106
細胞描述
該細胞係的母細胞株MM.1是從(cong) 一位對類固醇療法產(chan) 生抗藥性的多發性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米鬆耐藥。近緣細胞係MM.1S也是從(cong) MM.1中分離出來的，但對地塞米鬆敏感。該細胞複蘇後需要兩(liang) 周左右才能恢複正常生長。
細胞特性
1） 來源：人、女性、外周血
2） 形態：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁
3） 含量：>1x10^6
4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
6）用途：僅(jin) 供科研使用。
運輸和保存
幹冰運輸及複蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。
細胞接收後的處理
1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。
3）懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞在1000RPM條件下離心5min，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基）。
4）半貼細胞（或貼壁不牢細胞）：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在70%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮的細胞離心後用完全培養(yang) 基重懸後打回到原來的培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) ，若細胞生長到70%-90%可以對細胞進行傳(chuan) 代，在傳(chuan) 代過程中，需要收集T25瓶中懸浮的細胞離心後回收。
5）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。 收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。
細胞培養(yang) 步驟
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備1640（推薦：YJ-0002）基礎培養(yang) 基, 優(you) 質胎牛血清10 %，P/S青黴素-鏈黴素 1%
2） 注意事項：
a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態。
b.該細胞複蘇後需培養(yang) 2周左右時間，才能恢複正常生長狀態。
c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳(chuan) 代，否則容易成團。
3） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
參考傳(chuan) 代比例: 1:3-1:6，參考換液頻率: 2-3天
4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入T25培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度和拍照。
2 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
該細胞為(wei) 懸浮和輕微的貼壁細胞，傳(chuan) 代可以參考以下方法：
1） 懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養(yang) 瓶中添加完全培養(yang) 基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個(ge) /mL（不同細胞對密度要求不同，具體(ti) 可以參考細胞說明書(shu) ）可以維持細胞的正常生長。懸浮細胞的收集：將培養(yang) 瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)．貼壁細胞的的消化，pbs清洗1-2次 由於(yu) 細胞貼壁不牢，pbs清洗過程中會(hui) 有細胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗後的貼壁細胞按正常的貼壁細胞處理。加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%血清的培養(yang) 基來終止消化。
3）將收集到的懸浮細胞，消化下貼壁細胞和pbs清洗液中的細胞以1000rpm,5min離心重懸混勻後將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3 細胞凍存：收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。
下麵T25瓶為(wei) 例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入3-4ml含10%血清的完全培養(yang) 基來終止消化，收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×10^6~1×107個(ge) 活細胞/ml。
2．1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3．將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。
注意事項
1.收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養(yang) 箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體(ti) 外觀拍一張照片，觀察培養(yang) 基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為(wei) 我方進行銷售依據。
3.由於(yu) 細胞狀態受環境、操作和運輸等多方麵因素影響，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內(nei) 的細胞狀態，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大於(yu) 7天。
4.所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。
從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗技術及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!
如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。
實驗技術服務：
| |||
| |||
| |||
| |||
| |||
|
