LOVO/5FU 人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株
Fluorouracil resistant human colorectal cancer cell line ,LOVO 5FU
貨號：YJ-0057a（STR（lovo）鑒定）
價(jia) 格： 2500.0
規格： 1*10 6
細胞介紹
注：本培養(yang) 基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的。
細胞特性
1） 來源：結直腸腺癌
2） 形態：上皮樣 貼壁生長
3） 含量：>1x10^6 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅(jin) 供科研使用。
運輸和保存
幹冰運輸及複蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。
細胞接收後的處理
1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中）,加入新配製的完全培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。 收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
（1）培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
（2）完全培養(yang) 基的配製：
①準備F12K（推薦YJ-0007) 培養(yang) 基：優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%；補充F12K基礎培養(yang) 基至所需體(ti) 積。
②準備F12K含5-Fu完全培養(yang) 基：優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%；5-Fu：400~10^65uM；補充F12K基礎培養(yang) 基至所需體(ti) 積。
（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
注意：
① 細胞在傳(chuan) 代和剛複蘇時較為(wei) 脆弱，中止液須為(wei) 不含5-Fu的完全培養(yang) 基，且在細胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的完全培養(yang) 基，待細胞生長狀態穩定時再根據需要濃度添加5-Fu。
②若細胞生長狀態較為(wei) 緩慢時，可適當降低5-Fu的濃度，或使用不含5-Fu的完全培養(yang) 基培養(yang) 至細胞生長狀態較好時，再更換為(wei) 所需的5-Fu濃度。
二、細胞培養(yang)
（1）細胞複蘇
①將恒溫水浴鍋中的水預熱到37℃；
②準備一支15ml離心管，加入5mL含10%FBS的完全培養(yang) 基，放入37℃水浴鍋中預熱；
③戴上護目鏡，厚毛線手套後，從(cong) 液氮罐中取出要複蘇的細胞，盡快轉入37℃恒溫水浴鍋中複溫晃動凍存管以提高複溫速率；
④將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻後，1000rpm離心5min；
⑤準備一個(ge) T25培養(yang) 瓶，寫(xie) 上細胞名稱、日期，再加入4mL完全培養(yang) 基；
⑥離心完成後棄去上清，用1mL完全培養(yang) 基重懸細胞後，轉入T25細胞培養(yang) 中，混勻後轉入CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 靜置。
注意：從(cong) 液氮中取出細胞凍存管時，若凍存管內(nei) 有液氮進入，需擰鬆凍存管，排出內(nei) 部殘留的液氮，之後擰緊凍存管，置於(yu) 幹冰上，然後放入37℃水浴中，避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。
（2）細胞傳(chuan) 代
①當細胞匯合度達到85%以上時，可進行傳(chuan) 代；
②在生物安全櫃內(nei) ，打開培養(yang) 瓶瓶口，收集瓶內(nei) 的培養(yang) 基；
③向培養(yang) 瓶內(nei) 加入3mL無菌的1×PBS 後，水平放置培養(yang) 瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yang) 瓶底麵上所有的麵積，吸棄PBS；
④向瓶內(nei) 加入消化液1mL（0.25%胰蛋白酶），浸潤底麵後放入37℃ CO2培養(yang) 箱中孵育3~5min；
⑤孵育完成後在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yang) 瓶內(nei) 加入2mL含10%FBS的完全培養(yang) 基中，將懸液吸入15mL離心管；
注意：如還有部分細胞未消化下來，可采用分步消化：
a. 準備一個(ge) 無菌的15mL離心管，加入2mL含10%FBS的完全培養(yang) 基；
b.將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nei) 中和（避免吹打）；
c.向之前消化的培養(yang) 瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續消化2min左右，輕拍培養(yang) 瓶，95%左右細胞脫落後加入2mL含10%FBS的完全培養(yang) 基中和，中和後的細胞懸液移入①中的離心管內(nei) 。
⑥1000rpm離心5min；
⑦準備兩(liang) 個(ge) 新的T25培養(yang) 瓶，各加入4mL完全培養(yang) 基；
⑧離心完成後，棄上清，用2mL完全培養(yang) 基重懸離心細胞，將重懸後的細胞轉入2個(ge) T25培養(yang) 瓶，每個(ge) 培養(yang) 瓶各1mL；
⑨水平放置培養(yang) 瓶，震蕩混勻後將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃，5%CO2培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。
（3）細胞凍存 （注意：細胞凍存建議每瓶T25凍一支）
①~⑥請參照傳(chuan) 代步驟；
⑦離完成後，棄上清，用1mL凍存液重懸細胞沉澱，然後轉入1.8mL凍存管中；
⑧將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之後轉入-80℃冰箱中過夜降溫；
⑨第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項
1.收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養(yang) 箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體(ti) 外觀拍一張照片，觀察培養(yang) 基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為(wei) 我方進行銷售依據。
3.由於(yu) 細胞狀態受環境、操作和運輸等多方麵因素影響，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內(nei) 的細胞狀態，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大於(yu) 7天。
4.所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。
5.客戶在細胞培養(yang) 過程中，有技術問題可以聯係谘詢技術售後，我們(men) 隨時給予解答。
從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗技術及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!
如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。
實驗技術服務：
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