土壤脲酶 (S-UE) 活性檢測試劑盒說明書(shu)
微量法
注意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。
規格:100T/48S
產(chan) 品內(nei) 容:
試劑一: 甲苯2mL×1 瓶,4℃保存; (自備)
試劑二:粉劑×1 瓶,臨(lin) 用前加入9mL 蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的試劑4℃保 存;
試劑三:液體(ti) 19mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四A 液:液體(ti) 0.4mL×1 支,4℃保存;
試劑四B 液:液體(ti) 1.6mL×1 瓶,4℃保存;臨(lin) 用前將A 液倒入B 液中混合,待用;用不完的試 劑4℃保存一周;
試劑五:液體(ti) 2mL×1 瓶,4℃保存;
標準品:液體(ti) 1mL×1 支,1mg/mL 氮標準液。
產(chan) 品說明:
S-UE能夠水解尿素,產(chan) 生氨和碳酸。土壤脲酶活性與(yu) 土壤的微生物數量、有機物質含量、
全氮和速效氮含量呈正相關(guan) 。土壤脲酶活性反應了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍比色法測定脲酶水 解尿素產(chan) 生的NH3-N。
需自備的儀(yi) 器和用品:
可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯 (不允許快遞) 和蒸餾水。
操作步驟:
a. 培養(yang)
測定管 | 對照管 | |
風幹土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一 (μL) | 20 | 20 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置 15min | ||
試劑二 (μL) | 90 | |
蒸餾水 (μL) | 90 | |
試劑三 (μL) | 190 | 190 |
混勻,放入 37℃水浴培養(yang) 24h 後, 10000g 常溫離心 10min ,取上清液。 |
b. 將培養(yang) 結束的上清液稀釋10 倍 (取0. 1mL 上清液,加入0.9mL 蒸餾水) 。若最終計算得到的 ΔA仍大於(yu) 0.5繼續稀釋。
c. 標準品的準備:吸取適量的標準溶液,稀釋至10 、8 、6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/mL。
d. 測氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑)
測定管 | 對照管 | 標準管 | |
稀釋後的上清液 (μL) /標準品 | 80 | 80 | 80 |
試劑四 (μL) | 15 | 15 | 15 |
試劑五 (μL) | 15 | 15 | 15 |
充分混勻,室溫放置 20min | |||
蒸餾水 (μL) | 90 | 90 | 90 |
混勻,於(yu) 630nm 處,蒸餾水調零,讀吸光值 A ,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個(ge) 測定管設一 個(ge) 對照管。標準曲線的建立:根據標準管的濃度 (y) 和吸光度 ( x,減去濃度為(wei) 0 的空白管) ,做標 準曲線。
脲酶活力計算
根據標準曲線,將ΔA帶入公式 (x ) 計算測定中樣品的濃度 (μg/mL) y值。 單位的定義(yi) :每天每g土樣中產(chan) 生1μgNH3-N定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。
脲酶活力 (U/g 土樣) =y×10×V反總÷W÷T=60×y
10:稀釋倍數;T :反應時間,1d;V反總:反應體(ti) 係總體(ti) 積,0.3mL;W:樣本質量,0.05g。
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