慶大黴素快速檢測試劑盒說明書(shu)

一、原理

本試劑盒采用間接競爭(zheng) ELISA 方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物慶大黴素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭(zheng) 抗慶大黴素抗體(ti) ，加入酶標記物後，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與(yu) 其所含殘留物慶大黴素的含量成負相關(guan) ，與(yu) 標準曲線比較即可得出相應殘留物慶大黴素的含量。

二、試劑盒特性

u 試劑盒靈敏度：  0.05ppb

u 孵育溫度： 25℃

u 孵育時間： 30min～15min

u 樣本檢測下限

u 交叉反應率

u 樣本回收率

組織 ······································ 90%±20%

肝髒 ······································ 80%±20%

牛奶 ·······································   90%±18%

三、試劑盒組成

四、所用儀(yi) 器、試劑

具備的儀(yi) 器：酶標儀(yi) 、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道 100～1000µl、

多道 30～300 µl

五、樣本前處理步驟

u 樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否幹淨，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免汙染幹擾實驗結果。

u 樣本前處理需配製：配液 1 樣本提取液：

將 10X 濃縮提取液用去離子水按 1：9 稀釋。

u 樣本處理：

（a）組織（雞肉、豬肉、魚肉、蝦）、肝髒（雞肝、豬肝）樣本處理方法

1、取 1±0.05g 去除脂肪的粉碎樣本，加入 5ml 樣本提取液，振蕩 3min；4000r/min，室溫離心

10min；2、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本複溶液混勻，

混合 30s；3、取 50µl 用於(yu) 分析。

樣本稀釋倍數：50

（b） 牛奶樣本處理方法

1、取 0.5ml 均質的牛奶樣本，加入 2ml 樣本提取

液，振蕩 2min；4000r/min，室溫離心 5min；2、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本複溶液混勻，

混合 30s；3、取 50µl 用於(yu) 分析。

樣本稀釋倍數：50

六、酶標免疫分析程序:

u 測定前應須知：

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

（20～25℃）。

2、 使用之後立即將所有試劑放回 2～8℃。

3、 在 ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決(jue) 於(yu) 洗板的一致性，正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。

4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

u 操作步驟：

1、從(cong)  2～8℃冷藏環境中取出所需試劑，室溫（20～

25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體(ti) 試劑使用前均須搖勻。

2、取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放

入自封袋，保存於(yu) 2-8℃。

3、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水），或按所需用量配製洗滌液。4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每

個(ge) 樣本和標準品做 2 孔平行，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、加標準品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶標記物 50µl/孔，然後再加入抗體(ti) 工作液 50µl/ 孔，用蓋板膜封板，25℃環境中反應 30min。

6、將孔內(nei) 液體(ti) 甩幹，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍幹（拍幹後未清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破）。

7、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色 15min。

8、測定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀(yi) 於(yu) 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內(nei) 讀數），測定每孔 OD 值。

七、結果判定

結果判定有兩(liang) 種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與(yu) 其所含慶大黴素量成負相關(guan) 。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與(yu) 標準值比較即可得出其濃度範圍(ng/ml)。假設樣本 1 的吸光度值為(wei) 0.3，樣本 2 的吸光度值為(wei) 1.0，標準液吸光度值分別是：

0ppb 為(wei)  2.243；0.05ppb 為(wei)  1.816；0.15ppb 為(wei)  1.415； 0.45ppb 為(wei)  0.74；1.35ppb 為(wei)  0.313；4.05ppb 為(wei)  0.155。則樣本 1 的濃度範圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2

的濃度範圍是 0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為(wei) 樣本中慶大黴素實際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等於(yu) 標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(ge) 標準（0 標準）的吸光度值，再乘以 100%，即

B

百分吸光率（%）＝ ×100%

B₀

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B₀—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值

（2）標準曲線的繪製與(yu) 計算以標準品百分吸光率為(wei) 縱坐標，以慶大黴素標

準品濃度（ng/ml）的半對數為(wei) 橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從(cong) 標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為(wei) 樣本中慶大黴素實際濃度。

若利用試劑盒專(zhuan) 業(ye) 分析軟件進行計算，更便於(yu) 大量樣本的準確、快速分析。

八、 注意事項

1、室溫低於(yu)  25℃或試劑及標本未回到室溫（20～

25℃）會(hui) 導致所有標準的 OD 值偏低。

2、在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會(hui) 伴隨著標準曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。

3、混合要均勻，否則會(hui) 出現重複性不好的現象。

4、反應終止液為(wei)  2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(hui) 引起靈敏度、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。標準品 1 的吸光度值小於(yu) 0.5 時，表示試劑可能變質。

8、該試劑盒理想反應溫度為(wei)  25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

九、儲(chu) 藏條件和保質期

1、儲(chu) 藏條件：試劑盒於(yu)  2～8℃保存，不要冷凍。

2、保 質 期：該產(chan) 品有效期為(wei)  1 年，生產(chan) 日期見包裝盒。

提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。

從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!

如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。

實驗代做服務：