DNA/RNA提取試劑盒說明書(shu)
AllPureDNA/RNAKit
DNA/RNA提取試劑盒說明書(shu)
Cat.No. K0590
保存：室溫
組分說明
Cat.No. K0590
KitSize 50
BufferRL 35ml
BufferRW1 40ml
BufferRW2（concentrate） 11ml
RNase-FreeWater 10ml
BufferGW1（concentrate） 13ml
BufferGW2（concentrate） 15ml
BufferGE 15ml
SpinColumnDM 50
SpinColumnRM 50
CollectionTube（1.5ml） 100
CollectionTube（2ml） 150
產(chan) 品簡介
本試劑盒可用於(yu) 從(cong) 同一細胞或組織樣本中同時純化基因組 DNA 和總 RNA。由於(yu) 不需要將樣本分成兩(liang) 份用於(yu) 不同的純化步驟，該試劑盒可最大限度的回收 DNA 和 RNA。純化的 DNA 和 RNA 被單獨洗脫並可直接用於(yu) 各種下遊實驗。本試劑盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物質，無需乙醇沉澱，操作簡單、快捷。基因組 DNA 可用於(yu) PCR、Real-timePCR、SouthernBlot、DotBlot、比較基因組雜交（CGH）、基因分析和 SNP 分析；總 RNA 可用於(yu) RT-PCR、Real-timeRT-PCR、cDNA 的合成、NorthernBlot、DotBlot 等分析。
注意事項
1. 預防RNase汙染，應注意以下幾方麵：
1) 使用無RNase的塑料製品和槍頭，避免交叉汙染。
2) 玻璃器皿應在使用前於(yu) 180℃高溫下幹烤4小時，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鍾，用水*衝(chong) 洗後高壓滅菌。
3) 配製溶液應使用RNase-FreeWater。
4) 操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
2. 樣品應避免反複凍融，否則影響提取DNA和RNA的質量。樣品在BufferRL中，可於(yu) -70℃保存一個(ge) 月。
3. BufferRL在使用前請加入β-巰基乙醇，1mlBufferRL加10 μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的BufferRL室溫可保存1個(ge) 月。
4. 第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 BufferRW2、BufferGW1 和 BufferGW2 中加入無水乙醇。
5. 使用前請檢查 BufferRL 是否出現結晶或者沉澱，如有結晶或者沉澱，請於(yu) 56℃水浴重新溶解。
6. 所有離心步驟均使用台式離心機，室溫下進行。
自備試劑：β-巰基乙醇（新開封或提取 RNA 專(zhuan) 用）、70%乙醇（用無 RNase 的水配製）、無水乙醇
操作步驟
1. 材料處理
1a. 貼壁培養(yang) 的細胞應先處理為(wei) 細胞懸液（最大提取量為(wei) 107 個(ge) 細胞）, 收集細胞，棄盡培養(yang) 液，加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），反複吹打使其充分裂解。
注意：一定要棄盡培養(yang) 液，否則影響裂解和後續的核酸純化步驟。
1b. 取不大於(yu) 30mg的動物組織，液氮研磨成細粉末，加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），或直接加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），勻漿處理。
注意：勻漿要充分，否則影響RNA產(chan) 量。
2. 將上步所得溶液12,000rpm（～13,400×g）離心3-5分鍾，小心的將上清加入到已裝入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnDM）中，12,000rpm離心30-60 秒，收集濾液。將吸附柱DM放在一個(ge) 新的2ml收集管
（2mlCollectionTube）中，室溫或4℃放置，待提DNA。
注意：確保吸附柱 DM上沒有液體(ti) 殘留，如果有必要可以重複離心，直至所有的液體(ti) 通過吸附柱DM的膜。總RNA提取
3. 向步驟2所得濾液中加入1倍體(ti) 積的70%乙醇（無RNase的水配製），混勻。
4. 將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnRM）中，若一次不能全部加完溶液，可分次轉入。12,000rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
5. 向吸附柱RM中加入700 μlBufferRW1,12,000rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
6.向吸附柱RM中加入500 μlBufferRW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇）,12,000rpm離心20秒, 倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
7. 重複步驟6。
8. 12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱RM置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。
注意：此步驟目的是去除吸附柱RM中殘餘(yu) 的乙醇，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。
9. 將吸附柱RM置於(yu) 一個(ge) 新的無RNase1.5ml離心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱RM的中間部位加入30-50μlRNase-FreeWater，室溫放置2-5分鍾，12,000rpm離心1分鍾，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：1）RNase-FreeWate體(ti) 積不應小於(yu) 30 μl，體(ti) 積過小影響回收率。
2）如果要提高RNA的產(chan) 量，可用30-50 μl新的RNase-FreeWater重複步驟9。
3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重複步驟9。
基因組DNA 提取
10. 向吸附柱 DM 中加入 500 μlBufferGW1（使用前檢查是否加入無水乙醇）,12,000rpm 離心 20 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 DM 放回 2ml 收集管中。
11. 向吸附柱DM中加入500 μlBufferGW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇）,12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱DM放回2ml 收集管中。
12. 12,000rpm離心2分鍾，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱DM置於(yu) 室溫數分鍾，以*晾幹。
注意：這一步的目的是將吸附柱DM中殘餘(yu) 的乙醇去除，乙醇的殘留會(hui) 影響後續的酶促反應（酶切、PCR等）。
13. 將吸附柱DM置於(yu) 一個(ge) 新的無RNase1.5ml離心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱DM的中間部位加入100 μlBufferGE，室溫放置2-5分鍾，12,000rpm離心2分鍾，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：1）BufferGE的體(ti) 積不應小於(yu) 100 μl，體(ti) 積過小影響回收率。
2）如果要提高DNA的產(chan) 量，將100 μl新的BufferGE加至吸附柱上，重複步驟13。
3）如果要提高DNA濃度，可以將步驟15所得的DNA洗脫液重新加至吸附柱上，重複步驟13。
附表 1 吸附柱 DM 和吸附柱 RM 的規格說明
規格 吸附柱 DM 吸附柱 RM
最大結合能力 100µgDNA 100µgRNA
最大加樣量 700µl 700µl
結合核酸分子量 DNA15–30kb RNA>200 核苷酸
最小洗脫體(ti) 積 100µl 30µl
從(cong) 2011年開始我們(men) 致力於(yu) 在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作夥(huo) 伴!
如果您受時間、試驗條件等限製而無法完成您的課題研究，歡迎您與(yu) 我們(men) 聯係。
實驗代做服務：
| |||
|
| ||
| |||
|
