小反芻獸(shou) 疫抗體(ti) 檢測試劑盒（酶聯免疫法）使用說明書(shu)

【產(chan) 品名稱】

通用名：小反芻獸(shou) 疫抗體(ti) 檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【預期用途】 小反芻獸(shou) 疫是由小反芻獸(shou) 疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳(chuan) 染病，其特征為(wei) 口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動物為(wei) 山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對牛無感染性。

本試劑用於(yu) 檢測羊血清中小反芻獸(shou) 疫病毒抗體(ti) ，可用於(yu) 小反芻獸(shou) 疫疫苗免疫效果評價(jia) 。

【原理】

    本試劑盒係由預包被小反芻獸(shou) 疫病毒重組抗原的酶標板、抗體(ti) 工作液、酶標記物及其他配套試劑組成，應用競爭(zheng) 酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻獸(shou) 疫病毒抗體(ti) 。實驗時在酶標板中加入待檢樣本和抗體(ti) 工作液，經溫育後洗滌除去未結合的其他成分後；再加入酶標記物，與(yu) 酶標板上抗原抗體(ti) 複合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有小反芻病毒抗體(ti) 則將阻斷抗體(ti) 工作液與(yu) 酶標板上抗原結合，從(cong) 而使後續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與(yu) 樣品中的特異性抗體(ti) 含量成負相關(guan) ；加入終止液終止反應後，產(chan) 物變為(wei) 黃色；用酶標儀(yi) 在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻獸(shou) 疫病毒抗體(ti) 。

【試劑盒組成】

【儲(chu) 存及有效期】 儲(chu) 存於(yu) 陰涼幹燥處（2-8℃），有效期期12個(ge) 月。

    包被板開封後請於(yu) 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為(wei) 2個(ge) 月。

【適用儀(yi) 器】 含450nm、630nm波長的酶標儀(yi) ，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.濃縮洗滌液使用前應恢複至室溫使沉澱溶解，然後用蒸餾水或去離子水20倍稀釋成工作洗滌液。

2.取動物全血按常規方法製備血清，要求血清清亮，無溶血、無汙染。樣品1周內(nei) 可於(yu) 2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

3.用工作洗滌液將待檢血清樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鍾，恢複至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入稀釋後的樣品50μl。

4.每孔加抗體(ti) 工作液50μl，混勻，置37℃反應30分鍾。

5.甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，重複洗滌5次，拍幹。

6.每孔加酶標記物100μl，置37℃反應30分鍾。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應15分鍾。

9.每孔加終止液50μl，混勻，於(yu) 450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】

1.PI（阻斷率）=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%，PI≥50%為(wei) 陽性；PI＜50%為(wei) 陰性。

2.本實驗結果為(wei) 陰性表明羊隻抗體(ti) 水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅(jin) 作為(wei) 定性檢測羊血清中小反芻獸(shou) 疫病毒抗體(ti) ，根據PI值高低可作抗體(ti) 水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yan) 格健全和執行消毒隔離製度，各種實驗廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水衝(chong) 洗。

3.酶標板從(cong) 冷藏環境中取出時應恢複至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有幹燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢複至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體(ti) ，防止孔口有遊離酶不能洗淨。

6.用於(yu) 檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準。

8.不同批號試劑組分不得混用。

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