FastTaqMan Mixture（With ROX）說明書(shu)

Cat. No.   K2390

保存：-20℃避光

如需頻繁使用，2-8℃保存，盡量避免反複凍融。

組分說明

                          2×FastTaqMan Mixture

 Cat. No.     Kit Size                                          RNase-Free Water（With ROX）

K2390     50 μl 反應×40 次（1 ml）  1 ml                      1 ml

K2390A   50 μl 反應×200 次（5 ml） 5×1 ml                 5 ml

產(chan) 品簡介

    FastTaqMan Mixture(With ROX)是專(zhuan) 用於(yu) 探針法(TaqMan，Molecular Beacon 等）實時熒光定量 PCR 的預混體(ti) 係，濃度為(wei) 2×,包含 Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg 2+ 和 ROX 校正染料，操作簡單方便。主要用於(yu) 基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉錄後的 cDNA 靶序列檢測。本品含有的 Fast Taq DNA Polymerase，能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結合或引物二聚體(ti) 而產(chan) 生的非特異性擴增，酶的激活僅(jin) 需在 95℃孵育 30s。整個(ge) PCR 反應過程比普通反應可節省約 40 分鍾，大大縮短了 PCR 的反應時間。*的 PCR 緩衝(chong) 體(ti) 係與(yu) 快速熱啟動酶的組合，有效抑製了非特異產(chan) 物的產(chan) 生，並顯著提高了 PCR 的擴增效率，熒光信號更強，靈敏度更高，線性範圍更寬。該產(chan) 品適用範圍廣，可用於(yu) 普通和快速定量 PCR 程序。所含的 ROX 染料可校正定量 PCR 儀(yi) 孔與(yu) 孔之間產(chan) 生的熒光信號誤差, 適用於(yu) 以 ROX 作為(wei) 校正染料的熒光定量 PCR 儀(yi) 。

注意事項

1     使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，並經短暫離心後使用。

2     本產(chan) 品中含有熒光染料 ROX，保存本產(chan) 品或配製 PCR 反應液時應避免強光照射。

3     避免反複凍融本品，反複凍融可能使產(chan) 品性能下降。本產(chan) 品長期保存可置於(yu) -20℃，避光。如果在短期內(nei) 需要頻繁使 用，可在 2-8℃保存。  

使用方法

以下舉(ju) 例為(wei) 常規的反應體(ti) 係和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小的不同進行相應的改進和優(you) 化。

1.   PCR反應體(ti) 係：

試劑                            50 μl反應體(ti) 係     終濃度

2×FastTaqMan Mixture（With ROX）    25 μl                    1×

Forward Primer，10 µM                      1μl                0.2 μM 1）

Reverse Primer，10 µM                       1μl                 0.2 μM   1）

Probe，10  μM                                 1μl                0.2  μM  2）

Template DNA                                    2 μl 3）

RNase-Free Water                             up to 50  μl

     注意：1）通常引物濃度以0.2  μM可以得到較好結果，可以在0.1-1.0 μM作為(wei) 設定範圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；

發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

2）所用探針的終濃度，與(yu) 使用的熒光定量PCR儀(yi) 、探針種類、熒光標記物質種類有關(guan) ，實際使用時請參照儀(yi) 器說明書(shu) ，或各熒光探針的具體(ti) 使用要求進行濃度的調節。

3）通常DNA模板的量以10-100 ng基因組DNA或1-10 ng cDNA為(wei) 參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。

2.   PCR反應程序：

     兩(liang) 步法PCR：

步驟                     溫度               時間

預變性                    95℃              30 s  1）

變性                     95℃              5 s       

                                            35-40 個(ge) 循環

退火/延伸       2）        60℃              30 s

     注意：1）本產(chan) 品所采用的酶須在預變性95℃、30s條件下實現酶的活化。在此條件下，大多數模板可良好的進行解鏈。對GC含量高、二級結構複雜的模板，可將預變性時間延長至1～4分鍾，以使起始模板充分解鏈。

2）建議采用兩(liang) 步法PCR反應程序，若因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嚐試進行三步法PCR擴增，退火溫度請以  56℃-64℃的範圍作為(wei) 設定參考。

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