豬瘟病毒ELISA抗體(ti) 檢測試劑盒說明書(shu)

【產(chan) 品名稱】

通用名稱：豬瘟病毒抗體(ti) 診斷試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody（CSFV Ab）,ELISA

【規格】

96T×2/盒

【用途】

用於(yu) 檢測豬血清中豬瘟病毒抗體(ti) ，適用於(yu) 對豬場豬瘟疫苗免疫狀況的評價(jia) 以及感染豬的血清學診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬瘟病毒重組抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為(wei) 包被抗原與(yu) 樣本中的CSFV-Ab結合，再與(yu) 酶標抗豬IgG抗體(ti) 形成“包被抗原+CSFV-Ab+酶標抗豬IgG抗體(ti) "複合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與(yu) CSFV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色後，經酶標儀(yi) 檢測所得結果超過設定的臨(lin) 界值時結果判為(wei) 陽性，即表明免疫產(chan) 生了抗體(ti) 或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀(yi) ，雙波長450/630nm濾光片

2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為(wei) 豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴(yan) 重溶血、有沉澱物、含懸浮纖維蛋白及汙染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3．樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得最佳結果。.

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（即：5μl血清加195μl樣品稀釋液），混合均勻。

3．配製洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使結晶*溶解。

【檢驗方法】

1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl於(yu) 相應孔中。其餘(yu) 為(wei) 樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。

2．溫育：加樣後，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鍾。

3．洗板：甩去孔內(nei) 液體(ti) ，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10秒，直接甩出，洗滌3次，最後一次洗滌後拍幹板內(nei) 液體(ti) 。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鍾。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鍾。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止後即讀數。

9．讀數：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀(yi) 上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥1.0，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體(ti) 存在與(yu) 否，或樣本中抗體(ti) 的相對水平的高低由S/P值決(jue) 定，S/P值計算時按以下方式處理:

 S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值（0.05以下的數值按0.05計算），PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當樣本的S/P≥0. 25時判為(wei) 陽性；樣品S/P值＜0.25時判為(wei) 陰性；

若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專(zhuan) 業(ye) 分析軟件進行分析數據結果，該軟件可登陸本公司網站下載。

【注意事項】

1．本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不同批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書(shu) 。

4 使用前，濃縮的洗滌液應恢複至室溫（20～25℃），並搖動使沉澱溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鍾），然後用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日。

5．本試劑盒應按含有傳(chuan) 染性材料對待，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鍾，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鍾後廢棄。

6．微孔板從(cong) 冷藏環境中取出時應在室溫中平衡。未用完的液體(ti) 試劑應蓋好瓶蓋，與(yu) 其它配套組份放入試劑盒中於(yu) 2℃-8℃避光保存。

7．應用微量移液器加入樣本及試劑，並經常校對其準確性。

8．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有遊離酶不能洗淨或各孔間的交叉汙染。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水衝(chong) 洗幹淨。

【儲(chu) 存條件及有效期】

於(yu) 2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(ge) 月。

【生產(chan) 日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

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