GoldStar Best DNA Polymerase說明書(shu)

(5×GoldStar Best PCR Buffer With Mg  )2+

目錄號：K0654

保存條件：-20℃保存。

組分說明

  Cat. No.                                                    k0654        k0654A     k0654C

  Kit Size                                                     250 U        500 U       6×500 U

  GoldStar Best DNA Polymerase, 5 U/μl      50 μl       100 μl     6×100 μl

  5×GoldStar Best PCR Buffer                    1 ml         2×1 ml     3×5 ml

             注意：本產(chan) 品的5×GoldStar Best PCR  Buffer中含有7.5mM鎂離子。

產(chan) 品簡介

　　該產(chan) 品是經過特殊處理的熱啟動高保真聚合酶。該聚合酶具有  5′-3′DNA聚合酶活

性，5′-3′核酸外切酶活性和3′-5′核酸外切酶活性，在普通PCR條件下，與(yu) GoldStar Taq

DNA Polymerase相比，具有擴增效率高、錯配率低的優(you) 良性能。化學修飾使該酶在常

溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結合或引物二聚

體(ti) 而產(chan) 生的非特異性擴增，酶的激活須在 95℃下孵育10分鍾，該條件可以整合入已有

的PCR熱循環程序。優(you) 化的緩衝(chong) 體(ti) 係使酶的作用發揮最大功效，實現對目的片段的高

保真、高特異性、高擴增效率、高靈敏度擴增。使用本製品擴增得到的   PCR產(chan) 物的3′

端附有一個(ge) “A”堿基，因此可直接用於(yu) T/A克隆。本產(chan) 品應用於(yu) 常規的PCR、RT-PCR和

多重PCR，特別適用於(yu) 對特異性、保真性和擴增效率均有較高要求的PCR。

活性定義(yi)

　　用活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wei) 模板/引物，在74℃，30分鍾內(nei) ，將10nmol脫

氧核苷酸摻入到酸性不溶物質所需的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 活性單位（U）。

質量控製

　　經過多次柱純化， SDS-PAGE檢測其純度大於(yu) 99%；經檢測無外源核酸酶活性；

PCR方法檢測無宿主殘餘(yu) DNA；能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一

個(ge) 月，無明顯活性改變。

                本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途

  使用方法

    以下舉(ju) 例為(wei) 常規PCR反應體(ti) 係和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的

    片段大小不同進行相應的改進和優(you) 化。

    1. PCR反應體(ti) 係

試劑                                     50 μl反應體(ti) 係      終濃度

5×GoldStar Best Taq PCR Buffer                                10 μl                 1×

dNTP Mix，2.5 mM each                                         4 μl             200 μM each

Forward Primer，10 μM                                        2 μl                   0.4 μM

Reverse Primer，10 μM                                         2 μl                   0.4 μM

Template DNA                                                         <1 μg               <1 μg/reaction

GoldStar Best Taq DNA Polymerase，             5 U/μl               0.5 μl

RNase-Free Water                           up to                 50 μl

       注意：1）引物濃度請以終濃度0.1-1.0 μM作為(wei) 設定範圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提

       高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

       2）鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為(wei) 設定範圍的參考。本產(chan) 品的5×GoldStar Best Taq PCR

       Buffer中已含有7.5 mM鎂離子，可根據不同引物對和模板調節鎂離子濃度，由此優(you) 化反應體(ti) 係。

    2. PCR反應條件

步驟                 溫度              時間

預變性                95℃            10 min

變性                  94℃            30 s

退火                 55-65℃          30 s     30-40個(ge) 循環

延伸                  72℃            60 s

終延伸                72℃            5 min

       注意：1）一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優(you) 化反應條件。

       2）延伸時間應根據所擴增片段大小設定，本產(chan) 品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的擴增效率為(wei) 1 kb/min。

       3）可根據擴增產(chan) 物的下遊應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會(hui) 增加，非特異性背景嚴(yan) 重。所以在保證產(chan) 物得率的前提下應盡量減少循環次數。

       4）本產(chan) 品須在預變性95℃，10 min條件下實現酶的活化。

    3.結果檢測：反應結束後取5  µl反應產(chan) 物，加入適量上樣緩衝(chong) 液後進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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