超純RNA提取試劑盒說明書(shu)
Ultrapure RNA Kit
目錄號：K0581
保存條件：Buffer RLT 2-8℃避光保存。其他組分室溫（15-25℃）保存。
組分說明
Cat. No. K0581
Kit Size 50
Buffer RLT 60 ml
Buffer RW1 40 ml
Buffer RW2（concentrate） 11 ml
RNase-Free Water 10 ml
Spin Column RM 50
Collection Tube（1.5 ml） 50
Collection Tube（2 ml） 50
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途
產(chan) 品簡介
本試劑盒是基於(yu) TRIzon改進後的柱式總RNA提取試劑盒，裂解液充分裂解並勻質
化樣本，采用*的矽基質膜吸附技術，通過離心吸附柱在高鹽狀態下高效專(zhuan) 一的結
合溶液中的RNA，同時最大限度的有效除去蛋白質、無機鹽離子及有機雜質等；可從(cong)
動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yang) 細胞等樣品中快速提取總RNA，每次可處理
30-50 mg組織或5×10細胞，可同時處理多個(ge) 不同樣品。本試劑盒提取得到的RNA可直
接應用於(yu) RT-PCR、Northern6 Blot、Dot Blot、體(ti) 外翻譯等實驗。
產(chan) 品特點
·純度高：最大限度除去蛋白質等雜質，提取的RNA可直接用於(yu) 下遊各種實驗。
·提取量大：*的裂解液配方，充分裂解細胞或組織，RNA提取量多至100μg。
·快速：步驟少，操作簡單，節省時間。
·兼容性強：適用於(yu) 多種動植物組織和細胞RNA的提取。
自備試劑：氯仿(新開封或提取RNA專(zhuan) 用)、70%乙醇(無RNase水配製)、無水乙醇。
實驗前準備及重要注意事項
1．預防RNase汙染，應注意以下幾方麵：
1）使用無RNase的塑料製品和槍頭，避免交叉汙染。
2）玻璃器皿應在使用前於(yu) 180℃高溫下幹烤4小時，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸
泡10分鍾，用水*衝(chong) 洗後高壓滅菌。
3）配製溶液應使用無RNase的水。
4）操作人員戴一次性口兆罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
2．樣品應避免反複凍融，否則影響RNA提取得率和質量。
3．使用前若發現Buffer RLT有沉澱，可置於(yu) 56℃水浴幾分鍾，即可溶解。
4．第一次使用前應按照試劑瓶標簽說明在Buffer RW2中加入無水乙醇。
5．所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進行，且所有操作步驟動作要迅速。
6．若下遊實驗對DNA非常敏感，建議用不含RNase的DNase I（貨號：K2090A）對
RNA進行處理。
操作步驟
1．樣品處理
1a.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎後直接在Buffer
RLT中迅速研磨，每30-50 mg組織加入1 ml Buffer RLT，混勻。
注意：樣品體(ti) 積一般不要超過Buffer RLT體(ti) 積的10%。
1b.動物組織：取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎，每30-50 mg組織加入1 ml
Buffer RLT，勻漿儀(yi) 進行勻漿處理。或在液氮中研磨後加入Buffer RLT 1 ml混勻。
注意：樣品體(ti) 積一般不要超過Buffer RLT體(ti) 積的10%。
1c.單層培養(yang) 細胞：吸去培養(yang) 液，可直接在培養(yang) 板中加入適量Buffer RLT（每10 cm 2
麵積需要1 ml Buffer RLT），用取樣器反複吹打使細胞裂解。也可用胰蛋白酶處理後，
將細胞溶液轉移至RNase-Free的離心管中，300×g離心5 min，收集細胞沉澱，仔細
吸除所有上清，加入Buffer RLT 1 ml混勻。
注意：1）收集細胞數量不要超過1×107。
2）Buffer RLT加量根據培養(yang) 板麵積決(jue) 定，不是由細胞數決(jue) 定。如果Buffer RLT加量不足，可能導致提取的RNA中有DNA汙染。
3）收集細胞時一定要將細胞培養(yang) 液去除幹淨，否則會(hui) 導致裂解不*，造成RNA的產(chan) 量降低。
1d.細胞懸液：離心收集細胞。每5×106 -1×107動物、植物和酵母細胞或每107細菌
注意：細胞加入1）加入1 mlBuffer Buffer RLT RLT前不要洗。 滌細胞，以免RNA降解。
2）一些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀(yi) 或液氮研磨處理。
1e.血液處理：直接取新鮮的血液，加入3倍體(ti) 積的Buffer RLT（推薦0.25 ml全血加入
0.75 ml Buffer RLT），充分振蕩混勻。
1f.可選步驟：對於(yu) 蛋白、脂肪、多糖或胞外物質含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組
織或植物的塊莖，可以在勻漿處理後4℃，12,000 rpm（~13,400×g）離心10分鍾以除去不溶物質，此時沉澱中含胞外物質、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在於(yu) 上清中。
2．樣品中加入Buffer RLT後反複吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鍾，使蛋白
核酸複合物*分離。
3．以每1 ml Buffer RLT加入200 μl氯仿的比例加入氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，
室溫放置2分鍾。
4．4℃ 12,000 rpm（~13,400×g）離心10分鍾，此時樣品分為(wei) 三層：紅色有機相，中間層和上層無色水相， RNA主要在上層水相中，將上層水相移到一個(ge) 新的 RNase-
Free離心管（自備）中。
5．在得到的水相溶液中加入等體(ti) 積的70%乙醇（無RNase水配製），顛倒混勻。
6．將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管（Collection Tube 2 ml）的吸附柱（Spin
Column RM）中。若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12,000 rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入700 μl Buffer RW1，12,000 rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，
將吸附柱重新放回收集管中。
8．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000
rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9．重複步驟8。
10．12,000 rpm離心2 分鍾，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置於(yu) 室溫數分鍾，*晾幹。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘餘(yu) 乙醇去除，乙醇殘留會(hui) 影響後續酶促反應（酶切、PCR等）。
11．將吸附柱置於(yu) 一個(ge) 新的無RNase離心管（Collection Tube 1.5 ml）中，向吸附柱的
中間部位加入30-50 μl RNase-Free Water，室溫放置1分鍾，12,000 rpm離心1分鍾，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：1）RNase-Free Wate體(ti) 積不應小於(yu) 30 μl，體(ti) 積過小影響回收率。
2）如果要提高RNA的產(chan) 量，可用30-50 μl新的RNase-Free Water重複步驟11。
3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重複步驟11。
實驗代做服務：
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