複雜植物總RNA提取試劑說明書(shu) 

RNApurePlantPlusReagent

複雜植物總RNA提取試劑



Cat.No.  K0537 

保存：    2-8℃

組分說明

Cat.No.                   K0537        K0537A

複雜植物總RNA 提取試劑    16ml        80ml

產(chan) 品簡介

    本試劑可從(cong) 植物組織、特別是富含多酚或澱粉的植物組織（如甘蔗、馬鈴薯塊莖、鬆針、蘋果、香蕉、山藥等）中，提取總RNA，操作方便、快捷。每 100ml（加入β-巰基乙醇後的終體(ti) 積）可處理 100mg 組織 200 次，處理 5g 組織 4次。由本試劑提取的 RNA 純度高，可直接應用於(yu) 下遊實驗，如 cDNA 合成、RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、

DotBlot、體(ti) 外翻譯等。

注意事項

1.  預防RNase汙染，應注意以下幾方麵：

   1）使用無RNase的塑料製品和槍頭，避免交叉汙染。

   2）玻璃器皿應在使用前於(yu) 180℃高溫下幹烤4小時，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鍾，用水*衝(chong) 洗後高壓滅菌。

   3）配製溶液應使用無RNase的水。

   4）操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。

2.  提取的樣品避免反複凍融，否則影響RNA提取得率和質量。

3.  複雜植物總RNA提取試劑在使用前請加入β-巰基乙醇，將β-巰基乙醇與(yu) 複雜植物總RNA提取試劑以1:4的體(ti) 積混合，加 入β-巰基乙醇後的複雜植物總RNA提取試劑可在4℃保存1個(ge) 月。

4.  本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體(ti) 內(nei) 、接觸皮膚、吞食等會(hui) 導致中毒、灼傷(shang) 以及其他身體(ti) 傷(shang) 害。使用本製品時應穿戴防護物品，如防護服裝、手套、眼罩、麵罩等。如果不小心接觸到眼睛，應立即用大量的水衝(chong) 洗並前往醫院治療。

5.  保存在 75%乙醇中的 RNA 沉澱，2-8℃可以保存一周，-20℃條件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比較短，容易降解，

   建議提取後盡快進行後續實驗，如反轉錄成 cDNA，NorthernBlot 等。

6.  若下遊實驗對 DNA 非常敏感，建議用不含 RNase 的 DNaseI（貨號：K2090）對 RNA 進行處理。

自備試劑：β-巰基乙醇、5MNaCl、氯仿、異丙醇、75%乙醇、無RNase的水

操作步驟

小量樣本提取步驟：

1.   取不多於(yu) 100mg的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨後的粉末收集到離心管（自備）中。

2.   加入500 μl 複雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與(yu) 複雜植物總RNA提取試劑以1:4的體(ti) 積混合），反複吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鍾，使蛋白核酸複合物*分離。

3.   4℃ 12,000rpm離心1分鍾，將上清轉移到一個(ge) 新的RNase-Free離心管（自備）中。

4.   在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl，混勻。

5.   加入300μl 氯仿，上下顛倒充分混勻。

6.   4℃ 12,000rpm離心10分鍾，將上清轉移到一個(ge) 新的RNase-Free離心管（自備）中。注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重複步驟5、6一次。

7.   加入等體(ti) 積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鍾。

8.   4℃ 12,000rpm離心10分鍾，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉澱。

9.   加入1ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心3分鍾，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉澱。

    注意：剩餘(yu) 的少量液體(ti) 可短暫離心，然後用槍頭吸出，注意不要吸棄沉澱。

10.  室溫放置2-3分鍾，晾幹。加入30-50μl 無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

    注意：沉澱不要過分幹燥，以免難於(yu) 溶解。

大量樣本提取步驟：

1.   取1g的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨後的粉末收集到離心管（自備）中。

2.   加入5ml 複雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與(yu) 複雜植物總RNA提取試劑以1:4的體(ti) 積混合），反複吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鍾，使蛋白核酸複合物*分離。

3.   4℃ 10,000rpm離心1分鍾，將上清轉移到一個(ge) 新的RNase-Free離心管（自備）中。

4.   每10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl，混勻。

5.   每10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿，上下顛倒混勻。

6.   4℃ 10,000rpm離心15分鍾，將上清轉移到一個(ge) 新的RNase-Free離心管（自備）中。

   注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重複步驟5、6一次。

7.   加入0.9倍體(ti) 積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鍾。

8.   4℃ 10,000rpm離心15分鍾，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉澱。

9.   加入5-10ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心5分鍾，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉澱。

注意：剩餘(yu) 的少量液體(ti) 可短暫離心，然後用槍頭吸出，注意不要吸棄沉澱。

10.  室溫放置2-3分鍾，晾幹。加入200μl 無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉澱不要過分幹燥，以免難於(yu) 溶解。

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