Protein A瓊脂糖凝膠說明書(shu)
Protein A-Agarose
Cat. No. K0011
保存：2-8℃
組分說明
Cat.No. K0011 K0011A
Volume 1 ml 5 ml
產(chan) 品簡介
本產(chan) 品可從(cong) 血清，腹水，細胞培養(yang) 上清和細胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物丌同亞(ya) 型的抗體(ti) 或包含抗體(ti) Fc 片段的基因工程重組蛋白。具有高IgG 結合特異性，高流速，低 Protein A-Agarose 脫落等特點。
注意事項
1. 凝膠從(cong) 冷室或冰箱中取出後在室溫下緩慢振搖恢複到室溫，裝柱，避免產(chan) 生氣泡影響柱效。
2. 裝柱時盡可能維持凝膠長徑比為(wei) 5：3-2：1，長徑比過大將導致洗脫峰拖尾，洗脫體(ti) 積增大；長徑比過小將導致樣品不填料接觸時間短，吸附丌充分，填料吸附蛋白量小 。
3. 若上樣液中抗體(ti) 濃度過高應使用平衡緩衝(chong) 液稀釋至1-2mg/ml，以免上樣濃度過高影響柱效。
4. 可以采用降低上樣時的流速來增加樣品不填料接觸時間從(cong) 而提高純化抗體(ti) 量。
5. 凝膠用低pH 緩衝(chong) 液洗脫時間應盡可能短，洗脫後用中性緩衝(chong) 液盡快中和至pH 中性，以延長親(qin) 和介質的使用壽命。
6. 洗脫後，應立刻用如中和緩衝(chong) 液將收集到的抗體(ti) 溶液中和到中性（pH7.4 左右），以利於(yu) 維持抗體(ti) 的生物活性，避免抗 體(ti) 失活。
7. 填料使用後應用 0.1M 檸檬酸鈉緩衝(chong) 液（pH3.0）做再生處理，長期采用Ji端的洗脫條件將縮短親(qin) 和介質的使用壽命。
8. 其它柱再生處理方法：本產(chan) 品使用10 次以上後先用20%乙醇洗 5 個(ge) 柱床體(ti) 積，再用70%乙醇洗脫5-10 個(ge) 柱床體(ti) 積，可洗脫脂類和疏水性較強的蛋白質，避免使親(qin) 和介質的載量下降、幹擾親(qin) 和介質的應用效果。
操作步驟
I 緩衝(chong) 液的準備
1. 平衡緩衝(chong) 液：純化不同動物和不同亞(ya) 型抗體(ti) 時所用平衡緩衝(chong) 液是丌同的，部分參照如下
抗體(ti) 平衡緩衝(chong) 液成分
人 IgG1、人 IgG2、小鼠 IgG2a、小鼠 IgG2b 20 mM 磷酸鹽緩衝(chong) 液，300 mM NaCl，pH 7.4-8.5
人 IgG3、人 IgG4、小鼠 IgG1、大鼠 IgG3 50 mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5
2. 洗脫緩衝(chong) 液：0.1M 檸檬酸鈉緩衝(chong) 液，pH4.0。
3. 再生緩衝(chong) 液：1M NaCl。
4. 中和緩衝(chong) 液：1M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1）對於(yu) 某些純化載量較少的抗體(ti) ，可適當提高需平衡緩衝(chong) 液中的鹽濃度（最高可達3M）和pH 值 （最高可達8.2），以提高抗體(ti) 和介質的吸附力。但是有時高pH會(hui) 使雜蛋白吸附增加，使用者應根據實際使用狀況適當調節。
2）以上緩衝(chong) 液使用前均需0.45μm濾膜過濾。
II 樣品的準備
1. 樣品最好用平衡緩衝(chong) 液稀釋5-10倍，以保證樣品液的成分及pH和平衡緩衝(chong) 液接近。若上樣體(ti) 積過大，可以采取調節上樣液pH和鹽濃度的方式，使樣品的pH和電導不平衡液接近，並使樣品中的緩衝(chong) 體(ti) 係不平衡緩衝(chong) 液相同。
2. 細胞培養(yang) 液中大量的血清蛋白會(hui) 對親(qin) 和層析造成一定的幹擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體(ti) 收率。
注意：樣品在上柱前需0.45μm微孔濾膜過濾。
III 操作步驟
1. 填料裝柱後，用超純水流洗3-5個(ge) 柱床體(ti) 積以洗掉乙醇，用平衡緩衝(chong) 液流洗5-10個(ge) 柱床體(ti) 積平衡柱子。
2. 將樣品上柱，上樣流速60cm/h。
3. 平衡緩衝(chong) 液再洗5-10個(ge) 柱床體(ti) 積，直至基線平穩。
4. 洗脫緩衝(chong) 液洗脫，收集洗脫峰，用中和緩衝(chong) 液將洗脫收集樣品中和到中性。
5. 立即用5-10個(ge) 柱床體(ti) 積平衡緩衝(chong) 液平衡柱子到中性。
6. 再生緩衝(chong) 液流洗3-5個(ge) 柱床體(ti) 積。先後用純水、20%乙醇分別流洗3-5 個(ge) 柱床體(ti) 積。柱子置於(yu) 4~8℃保存。
注意：操作中如果沒有實時的蛋白監測係統，收集洗脫峰時可以分階段收集到多個(ge) 管中，最後根據測定結果重新調整收集方式。
實驗代做服務：
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