RIPA裂解液（強）說明書(shu)
RIPA Lysis Buffer
目錄號：K2333
保存條件：4℃保存。
組分說明
Cat. No. K2333
Volume 100 ml
本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及其他用途產(chan) 品簡介
RIPA裂解液是一種傳(chuan) 統的組織以及細胞快速裂解液，主要用於(yu) 從(cong) 動物組織和哺乳
動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用於(yu) 裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度
可以分為(wei) 強、中、弱三類，具體(ti) 特點和差異請參考附表2，可根據實驗需求選擇相應產(chan)
品。RIPA裂解液（強）可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應用
於(yu) 蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。
RIPA裂解液（強）的主要成分為(wei) 50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton
X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium
fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑製劑，可有效抑製蛋白降解。
注意事項
1．為(wei) 防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。
2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度。
產(chan) 品可單獨向本公司訂購，如：YJ0014 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的
去垢劑，不能用Bradford法進行蛋白定量。
3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑製劑或磷酸酶抑製劑，以防止蛋
白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態。產(chan) 品可單獨向本公司訂購，如：K2200 蛋白酶抑製劑混合物，K2383 磷酸酶抑製劑混合物。
4．若需獲得更高濃度的蛋白，應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。
5．對於(yu) 培養(yang) 瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規方法消化細胞，再參考懸浮細胞蛋白提
取步驟操作。
6．對於(yu) 離心獲得的細胞，若不確定細胞體(ti) 積，可根據細胞數量計算RIPA裂解液的使用
量。如5×106個(ge) Hela細胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推。
操作步驟
I 細胞樣品
· 貼壁細胞蛋白抽提
1．小心傾(qing) 去貼壁細胞的培養(yang) 液。
2．可選步驟：若培養(yang) 基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請先使用預冷的
PBS漂洗細胞。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鍾內(nei) 加入蛋白酶抑製劑），試劑使用量請參考
附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。
表 1 貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表
細胞培養(yang) 板類型或培養(yang) 麵積 RIPA 裂解液使用量
100 mm* 500-1,000 µl
60 mm 250-500 µl
6 孔培養(yang) 板 200-400 µl /孔
24 孔培養(yang) 板 100-200 µl /孔
96 孔培養(yang) 板 50-100 µl /孔
* 對於(yu) 100 mm培養(yang) 板培養(yang) 的107個(ge) 細胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細胞類型不同略有差異）。
4．將裂解液轉移至新的離心管中，冰上孵育20分鍾，使細胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鍾。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
· 懸浮細胞蛋白提取
1．懸浮細胞2,500×g，離心5分鍾，棄去上清。
2．可選步驟：若培養(yang) 基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請使用PBS漂洗
細胞。漂洗後的細胞懸浮液2,500×g離心5分鍾，棄去上清。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鍾內(nei) 加入蛋白酶抑製劑），每5×106細胞加入約
200-500 µl RIPA裂解液，吹打均勻。
4．冰上放置20分鍾，使細胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鍾。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
II 組織樣品
1．取適當的RIPA裂解液，在使用前2-3分鍾內(nei) 加入蛋白酶抑製劑。
2．稱量實驗組織的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液後將組織剪成細
小碎片，用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當減少組織蛋白
抽提試劑使用量。
3．冰上孵育20分鍾，使細胞充分裂解。
4．14,000×g 離心10分鍾。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解產(chan) 物中可能會(hui) 出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為(wei) 基因組。
相關(guan) 產(chan) 品信息
目錄號 產(chan) 品名稱
K2333 RIPA裂解液（強）
K2334 RIPA裂解液（中）
K2335 RIPA裂解液（弱）
K2336 RIPA裂解液（強中弱套裝）
K2337 SDS裂解液
K0002/K0889 哺乳動物蛋白抽提試劑/哺乳動物蛋白抽提試劑盒
K0004/K0891 組織蛋白抽提試劑/組織蛋白抽提試劑盒
K0199B Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒
K2200 蛋白酶抑製劑混合物
K2383 蛋白磷酸酶抑製劑混合物
K0014 BCA蛋白定量試劑盒
K0022 SDS-PAGE凝膠製備試劑盒
K0023 ProteinShow-G250蛋白快速染色試劑
實驗代做服務：
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