蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）試劑盒說明書(shu)

微量法

正式測定管前務必取2-3個(ge) 預期差異較大的樣本做預測定

測定意義(yi)

蔗糖不僅(jin) 是重要的光合產(chan) 物，也是植物體(ti) 內(nei) 運輸的主要物質，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為(wei) 受體(ti) ，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶係統看作是蔗糖合成的主要途徑。

測定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與(yu) 間苯二酚反應可呈現顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與(yu) 顏色的深淺成正比。

需自備的的儀(yi) 器和用品

可見分光光度計/酶標儀(yi) 、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

試劑的組成和配製

提取液：液體(ti) 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體(ti) 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體(ti) 2mL×1 瓶，4℃保存

試劑四：液體(ti) 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：液體(ti) 6mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準備：

按照組織質量（g）：提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀(yi) 預熱30min以上，調節波長至480nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻，沸水浴30min，冷卻後，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下測定各管吸光值。標準管和空白管隻要做一管。每個(ge) 測定管需要設一個(ge) 對照管。

SPS 活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義(yi) ：每mg組織蛋白每分鍾催化產(chan) 生1μg蔗糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)）÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義(yi) ：每g組織每分鍾催化產(chan) 生1μg蔗糖定義(yi) 為(wei) 一個(ge) 酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/g 鮮重) = {C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)）÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷W

C 標準管：標準管濃度，1000μg/mL；V1：加入反應體(ti) 係中樣本體(ti) 積，0.01mL； V2：加入提取液體(ti) 積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應時間：10min。

常量多酚氧化酶檢測試劑盒(PPO)操作步驟