小鼠成纖維細胞(L-929)培養(yang) 說明書(shu)

細胞介紹

1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結締組織)，細胞係L的克隆。細胞係L是最早建立的連續培養(yang) 細胞係之一，而clone 929是最早的克隆株。從(cong) 一隻100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏鬆結締組織入脂肪組織中建立了親(qin) 本細胞係L。 第95代的細胞係L使用毛細管法分離單細胞建立了clone929。檢測發現鼠痘病毒陰性。

細胞特性

1） 來源：組織：皮下結締組織；疏鬆結締組織及脂肪 品係：C3H/An

2） 形態：成纖維細胞

3） 含量：>1x10⁶ 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮凍存或直接複蘇；（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備MEM培養(yang) 基(MEM,GIBCO,貨號C11095500BT，添加NaHCO3 1.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(you) 質胎牛血清，10%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yang) 基，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約1ml含血清的培養(yang) 基後加入凍存管中，再添加10%DMSO後進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

實驗代做服務：