人甲狀腺癌細胞(KMH-2)培養(yang) 說明書(shu)

細胞介紹

該細胞是人甲狀腺未分化癌細胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC）。

細胞特性

1） 來源：甲狀腺

2） 形態：梭形細胞，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞接受後的處理：

1） 收到細胞後，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們(men) 。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜並將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yang) 基，添加6ml本公司附帶的*培養(yang) 基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳(chuan) 代，傳(chuan) 代培養(yang) 用6ml本公司附帶的*培養(yang) 基。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否汙染，若發現汙染或疑似汙染，請及時與(yu) 我們(men) 取得聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

本公司的細胞培養(yang) 操作規程，供參考

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yang) 基(DMEM: Invitrogen,貨號12430)，90%；優(you) 質胎牛血清（FBS：GIBCO），10%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水麵要低於(yu) 凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yang) 基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3ml此細胞的培養(yang) 基終止消化。

3. 輕輕吹打後吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yang) 基的T-25培養(yang) 瓶中或含有14ml培養(yang) 基的T-75培養(yang) 瓶中培養(yang) 。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理並進行細胞計數。消化方法按照細胞傳(chuan) 代方法的1-3步驟進行，最後的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數後離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為(wei) 10%。加入DMSO後迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個(ge) 凍存管細胞數目大於(yu) 1X10⁶個(ge) 細胞凍存。

注意事項：

1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

實驗代做服務：